【摘 要】
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目的:研究茵陈蒿汤颗粒剂对母儿ABO血型不合的疗效,筛选茵陈中有效成分,并探究其作用的分子机制。方法:1、对我院产科诊断为母儿ABO血型不合的149例孕妇随机分为中药组和对照组。中药组采用口服茵陈蒿汤加减（颗粒剂）治疗,对照组采用维生素E+维生素C+苯巴比妥+吸氧治疗,比较两组患者治疗前后血清IgG抗A（B）效价变化和有无自然流产征兆,评估茵陈蒿汤对母儿ABO血型不合的疗效。2、采用HPLC法考察
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目的:研究茵陈蒿汤颗粒剂对母儿ABO血型不合的疗效,筛选茵陈中有效成分,并探究其作用的分子机制。方法:1、对我院产科诊断为母儿ABO血型不合的149例孕妇随机分为中药组和对照组。中药组采用口服茵陈蒿汤加减（颗粒剂）治疗,对照组采用维生素E+维生素C+苯巴比妥+吸氧治疗,比较两组患者治疗前后血清IgG抗A（B）效价变化和有无自然流产征兆,评估茵陈蒿汤对母儿ABO血型不合的疗效。2、采用HPLC法考察茵陈颗粒剂在254 nm、280 nm和324 nm三个波长下的色谱图。利用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件（2012A）》建立对照指纹图谱,评估茵陈颗粒剂不同批次间成分的稳定性。3、通过茵陈颗粒剂指纹图谱与对照品保留时间及紫外光谱图比对,进行共有峰指认并筛选目标药效成分。4、选择处于多能性髓系祖细胞状态的人红血球白血病K562细胞作为研究对象,用联苯苄胺染色,考察目标药效成分对K562细胞红系定向分化的影响。5、采用Western Blot（简称WB）技术检测经目标药效成分诱导后K562细胞中胎儿期红系分化标志蛋白的表达变化。6、采用CCK-8和流式细胞术检测经目标药效成分诱导后K562细胞的增殖和细胞周期分布情况。7、采用WB和和免疫荧光法（简称IF）检测经目标药效成分诱导后K562细胞中FOXO3和细胞周期相关蛋白的表达。结果:1、与西药组比,中药组可显著降低孕妇IgG抗体效价（P＜0.01）,两组孕妇均未出现自然流产征兆,结果提示茵陈蒿汤加减（颗粒剂）治疗有效,且疗效优于西药治疗。2、采用HPLC法,通过指纹图谱的对比,证实不同批次茵陈颗粒图谱相似度高,其品质稳定。3、通过对照品保留时间及紫外光谱图比对,指认茵陈颗粒剂中主要9种化学成分,最终筛选6,7-二甲氧基香豆素（6,7-dimethoxycoumari,6,7-DOC）作为目标药效成分。4、联苯苄胺染色结果显示:6,7-DOC诱导K562细胞向红系定向分化,呈剂量和时间依赖性。5、WB检测结果显示:6,7-DOC诱导K562细胞中红系分化标志蛋白α-globin、β-globin、γ-globin 的表达增加。6、CCK-8检测结果显示:6,7-DOC诱导K562细胞增殖被抑制,呈剂量和时间依赖性。流式细胞仪检测结果显示:6,7-DOC诱导K562细胞在G0/G1期的比例增加,在S期的比例减少,呈剂量依赖性。7、WB检测结果显示:6,7-DOC诱导K562细胞中FOXO3和p27的表达水平显著提高,在总CDK4/CDK6表达无变化的前提下,pCDK4/pCDK6被显著抑制,呈剂量依赖性。IF检测结果显示:6,7-DOC诱导K562细胞中FOXO3的表达（绿色荧光）显著提高,呈剂量依赖性。结论:1、茵陈蒿汤可有效治疗母儿ABO血型不合。2、6,7-DOC是茵陈蒿汤有效治疗母儿ABO血型不合的有效成分。3、6,7-DOC能够促进细胞红系定向分化,可能与通过诱导转录因子FOXO3介导的红系分化标志蛋白表达增加有关,同时也可能与在G0/G1期阻滞细胞从而抑制增殖间接促进分化有关。
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