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目的：1.研究不同雌激素受体配体和雄激素对内皮细胞增殖效应的影响；2.探讨不同雌激素受体配体对雄激素作用的影响。方法：1.采用人主动脉内皮细胞,分别以不同浓度的α雌二醇、p雌二醇、乙烯雌酚、他莫昔芬、染料木黄酮培养细胞48小时,MTS法检测细胞增殖活力；qRT-PCR方法检测cyclin A和VEGF mRNA表达水平,MSD化学发光法检测VEGF分泌水平,比较α雌二醇和p雌二醇对VEGF、cyclin A基因表达的影响。RT-PCR和Western blot检测雌激素受体α和雌激素受体p在mRNA和蛋白水平的表达；激素受体α激动剂PPT和雌激素受体p激动剂DPN干预人主动脉内皮细胞,比较PPT和DPN对入主动脉内皮细胞增殖的影响。2.用不同浓度的二氢睾酮干预人主动脉内皮细胞,在不同时间点(Oh,24h,48h),用MTS方法检测细胞增殖活力,确定二氢睾酮干预人主动脉内皮细胞的最佳浓度和时间。用不同浓度二氢睾酮(5nM,10nM)干预人主动脉内皮细胞48小时,qRT-PCR、MSD化学发光和Western blot方法检测雄激素受体、VEGF、cyclin A和cyclin D的mRNA和蛋白表达水平,比较雄激素受体、VEGF、cyclin A、cyclinD基因表达水平的变化。采用siRNA干扰的方法沉默雄激素受体的表达,在二氢睾酮10nM溶液中培养48小时,以非特异性siRNA干扰组为对照,了解二氢睾酮的促人主动脉内皮细胞增殖作用。3.分别用不同浓度的α雌二醇、p雌二醇、乙烯雌酚、染料木黄酮、他莫昔芬、氟维司群、PPT、DPN联合二氢睾酮10nM培养人主动脉内皮细胞48小时,用MTS法检测细胞增殖活性,设单纯二氢睾酮10nM为阳性对照组,了解各种雌激素受体配体对二氢睾酮促人主动脉内皮细胞增殖作用的影响,同时比较雌激素受体α激动剂、雌激素受体p激动剂对二氢睾酮促人主动脉内皮细胞增殖作用的影响。结果：1.α雌二醇、p雌二醇、乙烯雌酚、他莫昔芬、染料木黄酮对人主动脉内皮细胞增殖的影响：α雌二醇10nM组和100nM组细胞增殖活力显著高于对照组,分别增加24%(P<0.05)和31%(P<0.05),100nM组较10nM组增加更明显,呈剂量依赖趋势；p雌二醇、乙烯雌酚、他莫昔芬、染料木黄酮组,细胞增殖活力较对照组无显著统计学差异。α雌二醇和β雌二醇对VEGF、cyclin A表达的影响：α雌二醇100nM组cyclin A mRNA的表达较对照组上调60%(P<0.05),VEGF的表达较对照组无显著统计学差异。p雌二醇100nM组cyclin A和VEGF的表达较对照组无显著统计学差异。雌激素受体α、β亚型在人主动脉内皮细胞增殖中的作用：ERa激动剂PPT0.05nM,0.1nM和1nM组,细胞增殖活力较对照组增加,其中PPT1nM细胞增殖活力较对照组增加24%,有显著统计学差异(P<0.05)。ERβ激动剂DPN0.05nM,0.1nM和1nM组,细胞增殖活力较对照组无显著统计学差异。2.二氢睾酮对人主动脉内皮细胞增殖的影响：干预人主动脉内皮细胞48小时,自二氢睾酮5nM浓度开始,细胞增殖活力显著增加,呈剂量依赖趋势。干预48小时较干预24小时,细胞增殖活力增加更明显,呈时间依赖趋势。二氢睾酮对人主动脉内皮细胞雄激素受体(AR)、VEGF、cyclinA和cyclin D基因表达的影响：二氢睾酮5nM和10nM干预人主动脉内皮细胞48小时,AR、VEGF、cyclin A和cyclin D mRNA表达上调,二氢睾酮10nM组上调更明显(P<0.05),呈剂量依赖趋势。二氢睾酮10nM组,AR蛋白表达较对照组显著上调(P<0.05)。二氢睾酮5nM组和10nM组,VEGF分泌水平较对照组显著增加(13.38±2.95ng/ml vs.25.55±2.49ng/ml vs.3.52±0.87ng/ml, p<0.05)雄激素受体在人主动脉内皮细胞增殖中的作用：雄激素受体siRNA200nM可显著下调雄激素受体的表达(>90%)。雄激素受体siRNA200nM干扰后,二氢睾酮10nM培养人主动脉内皮细胞48小时,细胞增殖活力和DNA合成较相应非特异性siRNA组显著下降(P<0.05)。3.不同雌激素受体配体对二氢睾酮诱导的人主动脉内皮细胞增殖的影响：α雌二醇(10nM和100nM)、染料木黄酮(1gM)和PPT(0.05nM、0.1nM和1nM)联合二氢睾酮10nM组,较单纯二氢睾酮10nM组无显著统计学差异；p雌二醇(1nM、10nM和100nM)、乙烯雌酚(1nM、10nM和100nM)、他莫昔芬(100nM)、氟维司群(100nM和1000nM)和DPN(0.05nM、0.1nM和1nM)联合二氢睾酮10nM组较单纯二氢睾酮10nM组细胞增殖活力显著下降。结论：1.不同雌激素受体配体对人主动脉内皮细胞增殖的影响具有差异性。α雌二醇和PPT促进人主动脉内皮细胞增殖；p雌二醇、乙烯雌酚、他莫昔芬、染料木黄酮、氟维司群和DPN对人主动脉内皮的增殖无明显影响。2.二氢睾酮通过雄激素受体途径促进人主动脉内皮细胞增殖,并上调VEGF和cyclin A和cyclin D的表达。3.不同雌激素受体配体对二氢睾酮的促人主动脉内皮细胞增殖的影响具有差异性。α雌二醇、染料木黄酮和PPT对二氢睾酮诱导的人主动脉内皮细胞增殖无抑制作用；而β雌二醇、乙烯雌酚、他莫昔芬、氟维司群和DPN抑制了二氢睾酮诱导的人主动脉内皮细胞增殖作用。