【摘 要】
：
目的:中枢神经系统神经元在发生退行性疾病、中风或创伤后缺乏良好的再生能力。诱导非神经元细胞转化为神经元是一种新的中枢神经系统修复的细胞替代疗法,可避免免疫抑制。星形胶质细胞是大脑中最丰富的细胞,具有很强的增殖能力,它与神经元由同一种前体细胞分化而来,是利用该技术实现再生神经元的最佳选择。长链非编码RNA（long noncoding RNAs,lncRNAs）指一类长度超过200个核苷酸的长链非编
论文部分内容阅读
目的:中枢神经系统神经元在发生退行性疾病、中风或创伤后缺乏良好的再生能力。诱导非神经元细胞转化为神经元是一种新的中枢神经系统修复的细胞替代疗法,可避免免疫抑制。星形胶质细胞是大脑中最丰富的细胞,具有很强的增殖能力,它与神经元由同一种前体细胞分化而来,是利用该技术实现再生神经元的最佳选择。长链非编码RNA（long noncoding RNAs,lncRNAs）指一类长度超过200个核苷酸的长链非编码RNA分子,可在转录、转录后以及蛋白活性层面调控生理功能。lncRNA TUNA特异性地与三种RNA结合蛋白形成复合物,从而影响胚胎干细胞分化为神经元细胞。目前,lncRNA能否诱导非神经元细胞转化为神经元有待进一步研究。本研究证明了lncRNA TUNA过表达可在体外诱导小鼠星形胶质细胞转化为神经元,在体内可诱导其转化为神经干细胞,为细胞替代疗法修复中枢神经系统提供理论依据。材料与方法:本研究将从C57BL/6J小鼠（3日龄）大脑皮质中分离原代星形胶质细胞,培养并纯化星形胶质细胞,利用免疫荧光技术进行细胞纯度鉴定。利用慢病毒转染体外培养的星形胶质细胞过表达lncRNA TUNA使其转化为神经母细胞,利用免疫荧光技术对神经母细胞标志物进行检测,进一步利用神经营养因子BDNF促进转化的神经母细胞分化为神经元细胞,利用免疫荧光技术对神经元细胞进行鉴定;细胞划痕实验建立病理状态细胞模型后6 h利用慢病毒转染星形胶质细胞,检测观察病理状态下的细胞转化结果。利用立体定向注射技术,将慢病毒注入成年小鼠的右侧纹状体中,利用免疫组织化学技术检测目的细胞的转化效果,并观察转化后的不同时间变化。结果:1、利用免疫荧光技术鉴定原代星形胶质细胞纯度为95%,慢病毒转染效率为40%。2、转染一周后,与对照组相比实验组中可观察到TUBB3+细胞;免疫荧光结果表明实验组星形胶质细胞中Inc RNA TUNA的表达比对照组中高1500-3000倍;细胞转染后两周时获得MAP2免疫反应性,意味着树突成熟,但成熟神经元中表达的相关蛋白Neu N未被检测到。3、在细胞划痕模型中,转染两周后,实验组可检测转染的细胞获得MAP2免疫反应性而对照组则未能获得,并且能检测到Neu N。4、体内实验组,左侧纹状体内未检测到神经干细胞标记蛋白,右侧纹状体内仅在注射的部位可检测到神经干细胞标记的蛋白,细胞表现为未成熟神经元的形态;注射一周,神经干细胞标记蛋白阳性的细胞数量约为25个（X 1,000）,两周后,细胞数量急剧下降。结论:实验研究表明,lncRNA TUNA足以将分化成熟的星形胶质细胞在体外转化为神经元,并且能在体内将其转化为神经干细胞。本实验为细胞再生的治疗方法治疗中枢神经系统损伤提供理论支撑。如何促进转化而成的神经元行使其功能以及神经干细胞分化为神经元有待进一步研究。
其他文献
目的:晚期糖基化终末产物（AGEs）是还原糖与大分子物质通过非酶促反应产生的毒性化合物,可促进肥胖、糖尿病和心血管疾病的发生发展。先前的研究表明可溶性晚期糖基化终末产物受体（s RAGE）与多种代谢危险因素之间存在密切的联系,但结果仍存在争议。本研究旨在探讨我国中老年人群血浆s RAGE水平与代谢综合征（Met S）及其组分的关联性,为Met S的防治提供依据。方法:本研究依托同济-鄂州队列,研究
目的:本研究旨在将标准式脑室外引流技术与改良隧道式脑室外引流技术通过一项前瞻性的随机对照试验来比较此两种脑室外引流技术的相关感染率、并发症、预后等差异性。方法:2018年2月至2019年2月,在华中科技大学同济医学院附属协和医院神经外科中心进行了一项前瞻性、随机对照研究,并通过了伦理委员会的审核批准,每位患者入组前都要求签署知情同意书。随机将符合纳入和排除标准的患者分为两组,A组为标准脑室外引流组
目的肝移植术后胆道并发症和胆道重建技术一直是移植医师最为棘手的问题。本文探讨心脏死亡器官捐献肝移植术中显微外科技术结合7-0 PDS线与6-0 PDS线常规缝合相比,对胆道重建时间、住院时间及术后胆道并发症的发生率的影响,研究显微外科技术在肝移植胆道重建中的应用价值。方法回顾性分析自2014年8月至2019年12月在华中科技大学同济医学院附属协和医院完成的术中实施胆管-胆管端端吻合的100例成人肝
目的:通过对乙肝相关原发性肝癌、良性肝病（乙肝肝硬化、慢性乙型肝炎）患者血清中的磷脂酰肌醇聚糖3（glypican-3,GPC3）、Dickkopf相关蛋白1（dickkopf related protein 1,DKK1）及临床中常用的肿瘤标志物（甲胎蛋白、脱-γ-羧基凝血酶原（des-γ-carboxy prothrombin,DCP）、糖类抗原199、癌胚抗原）的表达水平进行分析,评估GPC
目的:初步研究羟基枸橼酸（hydroxycitric acid,HCA）能否抑制小鼠高草酸尿模型中草酸钙结晶的形成及可能机制。材料和方法:雄性C57BL/6J小鼠被分为对照组,乙醛酸（glyoxylate,GOX）组,低剂量HCA（GOX+HCA 100mg/kg）组和高剂量HCA（GOX+HCA 200mg/kg）组,每组10只。在第7天收集血液样品和肾脏标本。使用HE染色和Pizzolato染
目的探索HP1α与SUZ12在胆管癌发生发展过程中所发挥的作用以及其机制方法利用TCGA肿瘤基因表达谱数据库,Westernblot技术,PCR技术检测HP1α和SUZ12在胆管癌组织与对照组织的相对表达;利用慢病毒转染细胞构建HP1α和SUZ12敲低的稳转细胞株,通过Transwell试验,CCK-8,Edu试验检测胆管癌的增殖,迁移和侵袭能力;通过Westernblot,免疫共沉淀技术检测HP
目的:描述一种雌性犬尿道壁内血管窦压力（vascular sinusoids pressure,VSP）的测定方法方法:本研究选取健康成年雌性犬10只,年龄2～3岁,体重8～10Kg。在2%戊巴比妥钠静脉麻醉下行下腹中线切口,显露膀胱做造瘘并放置测压管用于测定膀胱内压（intra bladder pressure,IBP）,切开前庭暴露尿道外口,将6F单孔尿道测压管侧孔固定于尿道高压段腔内用于测定
建筑外窗是建筑围护结构中保温隔热性能最薄弱的环节,在节能减排的时代背景下,提高外窗的保温隔热性能是建筑节能的有效途径之一。本研究提出一种新型的建筑外窗结构多层膜排风窗,多层膜排风窗是一种利用室内空调排风进行主动隔热的外窗结构,由两层玻璃、玻璃之间空腔、空腔内置多层薄膜组成。普通排风窗让空调排风通过玻璃夹层中的空腔流向室外,使室内侧玻璃内表面接近室内空气温度以减少窗户形成的冷热负荷,而多层膜排风窗的
目的:对下睑成形术中行结膜入路眶隔脂肪重置的受术者进行回顾性分析,试图找出一种对该手术方式在“泪沟和睑颊沟”改善方面的客观评测方法,并研究“泪沟和睑颊沟”手术前后的改变及其意义。方法:回顾性分析华中科技大学同济医学院附属协和医院整形外科2017年5月至2019年5月间行结膜入路眶隔脂肪重置的受术者41例。这些纳入的患者含完整术前及至少术后4个月的标准化摄影。对所有纳入的受术者于2019年10月间统
目的:探讨缓激肽（bradykinin,BK）作为血清标志物在宫颈癌诊断中的作用,及其促进宫颈癌进展可能的作用机制。方法:1.收集130例宫颈癌患者（其中65例含术前后配对标本,65例仅术前标本）、35例宫颈上皮内瘤变（CIN）患者（术前和术后配对）和35例子宫肌瘤患者的血清标本,同时收集患者临床病例信息及血清SCCA检测结果,酶联免疫法（ELISA）检测以上血清标本中BK水平。绘制ROC曲线分别