减数分裂相关蛋白在不同阶段雌雄大鼠性腺中的表达与定位

来源 :山西农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:kobe20060121
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目的:生殖细胞进入减数分裂是真核生物性腺发育的一个关键事件。减数分裂作为生殖细胞特有的细胞分裂方式,在启动时受到一些特异性蛋白的调控,视黄酸(retinoic acid,RA)应答信号蛋白8(stimulated by retinoic acid gene 8,STRA8),联会复合体蛋白3(Synaptonemal Complex Protein 3,SCP3)和类无精症缺失基因(deleted in azoospermia-like gene,DAZL)在哺乳动物生殖细胞的减数分裂过程中扮演着重要的角色,对处于不同物种或同一物种的不同发育阶段而言,它们的调控机制又存在着许多差异。来自模型动物小鼠的研究显示,生殖细胞进入减数分裂的时间在雌鼠和雄鼠中不同,雌鼠的生殖细胞在胚胎阶段进入减数分裂前期I,而睾丸生殖细胞在胚胎期有丝分裂细胞周期停滞,直到出生后才进入减数分裂,但雌鼠和雄鼠进入减数分裂采用了相同的应答信号,即RA-STRA8信号。大鼠作为繁殖生物学研究常用模式动物,STRA8,SCP3和DAZL在减数分裂起始过程中是否同小鼠一样具有相似的表达特性,未见研究报道。本研究旨在探讨在胚胎期和出生后雌雄大鼠性腺中STRA8,SCP3和DAZL的表达与定位,进而了解哺乳动物的生殖细胞如何启动减数分裂,并为分子机制提供相应的依据。方法:本研究选用雌性和雄性SD大鼠,将SD大鼠分为两个发育阶段:胚胎期阶段和出生后阶段。将雌雄SD大鼠进行合笼,并分别在交配后12.5 d-16.5 d(12.5 dpc-16.5dpc)将怀孕的SD大鼠进行麻醉,取胎鼠性腺,一侧放在Bouin氏液中进行固定,用于制作石蜡切片;另一侧放入冻存管中用液氮速冻,用来提取总蛋白和总RNA。按照上述同样方法,分别取出生后1 d,2 d,5 d,7 d的两侧卵巢和睾丸。用q RT-PCR、Western Blot和免疫组织化学方法检测STRA8,SCP3和DAZL在大鼠性腺中的表达与定位。结果:1.免疫组化结果显示,在雌性SD大鼠中,STRA8主要在胚胎期生殖细胞的细胞质中表达,在出生后2 d卵巢的细胞质和细胞核中也存在明显表达,SCP3蛋白主要在胚胎期生殖细胞的细胞核表达,DAZL蛋白在雌性生殖细胞存在表达,在胚胎期低表达,出生后表达明显升高;在雄性大鼠中,STRA8和SCP3主要在出生后表达,STRA8,SCP3和DAZL在生殖母细胞均有表达,DAZL在胚胎期生殖细胞上低水平表达,STRA8在出生后精原细胞上有表达,SCP3在出生后精母细胞上表达。2.qRT-PCR结果显示,在雌性大鼠中,STRA8和SCP3的mRNA水平主要在胚胎期升高;在雄性大鼠中,STRA8和SCP3的mRNA水平在出生后与胚胎阶段相比升高。DAZL的mRNA水平在雌雄大鼠中出生后升高,在胚胎期12.5 dpc到16.5 dpc低水平表达。3.Western Blot结果显示,在雌性大鼠中,STRA8和SCP3的蛋白水平主要在胚胎期升高,出生后也存在表达;在雄性大鼠中,STRA8和SCP3的蛋白水平在出生后与胚胎阶段相比升高。DAZL的蛋白水平在雌雄大鼠中出生后明显升高,在胚胎期12.5 dpc到16.5 dpc中存在低蛋白水平表达。结论:在雌性大鼠中,STRA8和SCP3的定位和表达提示生殖细胞在大鼠胚胎阶段进入减数分裂,STRA8和SCP3可以作为大鼠减数分裂过程中的分子标记。同时,STRA8在细胞核中的定位增加了STRA8作为一种转录因子发挥作用或STRA8激活转录功能的可能性。在雄性大鼠中,STRA8和SCP3的定位和表达提示雄性大鼠在胚胎期减数分裂停滞,在出生后减数分裂恢复。DAZL在雌雄大鼠的生殖细胞上的表达,提示DAZL可以作为生殖细胞的标记基因。本项研究提供了大鼠雌雄减数分裂起始的差异,为丰富相关的减数分裂调节机制提供了形态学依据。
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