MiR-663调控KCTD10抑制乳腺癌的发展进程

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MicroRNAs是一类具有调控功能的小分子非编码RNA,在大多数情况下它与靶基因的3’UTR结合调节基因表达。miR-663具有组织特异性,在不同的肿瘤发展中行使多种功能,并且miR-663在不同类型乳腺癌中的作用机制存在争议性,因此可做进一步研究。大部分文献报道了KCTD10在早期胚胎发育和心血管发育方面有重要的功能,但在肿瘤方面的研究少见。在本课题开展之前,KCTD10只在胃癌、上皮型脑膜瘤、神经胶质瘤和肝癌中有过报道,关于它在乳腺癌中的作用并没有深入研究过。乳腺癌患者的死亡主要与癌细胞的转移有关,上皮-间质转化(EMT)是肿瘤转移的关键步骤,而有关miR-663和KCTD10在EMT中的作用和分子机制还未阐明。在本研究中,我们首先用实时定量PCR和蛋白质印迹实验发现了相较于正常乳腺细胞系HBL-100,miR-663和KCTD10在乳腺癌细胞系MCF-7,MDA-MB-231和MDA-MB-468中的RNA和蛋白水平呈现低表达,并且在不同亚型的乳腺癌细胞中,表达有差异。其次,我们构建了KCTD10过表达质粒,合成了KCTD10特异的si RNA,miR-663特异的mimics和inhibitor。在miR-663和KCTD10相对低表达的MCF-7细胞中做过表达处理,在相对高表达的MDAMB-231细胞系中做干扰处理。我们通过生物信息学分析获知miR-663与KCTD10的5’UTR存在结合位点,蛋白质免疫印迹结果显示miR-663上调KCTD10的表达。我们构建了含有KCTD10 5’UTR的荧光素酶报告质粒,用双荧光素酶实验验证了KCTD10确实是miR-663的靶基因,miR-663上调KCTD10的转录活性。最后,我们用MTT法、Transwell小室实验和Hoechst染色等实验证实了miR-663和KCTD10具有抑制肿瘤的能力。基于前面的功能研究,我们检测了乳腺癌细胞中EMT标记物的表达量。在MCF-7细胞中过表达KCTD10和miR-663,上皮标记物E-cadherin的蛋白表达量增加,间质标记物N-cadherin和Vimentin的表达下调;在MDAMB-231细胞中敲低内源的miR-663和KCTD10,EMT标记物的表达趋势与MCF-7细胞趋势相反,数据表明miR-663调控KCTD10抑制乳腺癌的EMT进程。综上,我们的研究揭示了miR-663与KCTD10的5’UTR结合,促进了KCTD10的表达,抑制了乳腺癌细胞的增殖、迁移、凋亡和EMT进程,减缓了转移所带来的肿瘤恶化进程,为乳腺癌的治疗提供了新思路。
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