拟南芥核糖体再循环因子AtcpRRF的功能研究

来源 :中国科学院研究生院 中国科学院大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:qdmarie
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高等植物的叶绿体拥有自己的基因组以及蛋白合成体系。但是叶绿体基因组只保留了不到100个基因,而两千多个叶绿体蛋白是由细胞核基因组编码,在细胞质内翻译,然后运输到叶绿体内执行功能,所以,叶绿体是一个半自主性的细胞器。为了深入研究细胞核编码的蛋白在叶绿体发育过程中的调控作用,我们通过叶绿素荧光成像系统筛选了T-DNA插入的拟南芥突变体库,并且分离并刻画了一株高叶绿体荧光并且具有浅绿叶色的突变体hfp108-1(high chlorophyll fluorescence and pale green mutant)。通过图位克隆,我们发现了引起该突变体表型的基因At3g63190,该基因含有11个外显子,编码一个叶绿体核糖体再循环因子(RRF, ribosome recyclingfactor)的同源性蛋白,因此我们称之为AtcpRRF。测序比对结果显示,突变体hfp108-1的基因At3g63190在起始密码子ATG后的第631到746个碱基这段序列(共116个碱基)相对于野生型的该基因发生了串联重复。突变体hfp108-1与野生型相比生长缓慢,其叶片中的叶绿体含有极少的类囊体膜,而且叶绿体编码的蛋白含量显著下降。体内标记实验显示,叶绿体基因编码的蛋白合成受到严重影响。进一步进行多聚核糖体结合实验发现突变体hfp108-1在叶绿体编码的蛋白合成的起始上受到影响;同时核酸杂交结果显示突变体中叶绿体编码蛋白的转录本含量下降到野生型的大约50%,这有可能是蛋白合成速率的下降引起了相应的mRNA的稳定性的下降,导致它们降解的结果。反转录PCR表明基因At3g63190的mRNA比起野生型急剧减少,但是还有极少量正确剪切的mRNA能够被检测到,所以突变体hfp108-1呈现出很弱的表型。另外,HFP108的完全敲除突变体hfp108-2是胚胎致死的。对hfp108-2杂合体果荚中的种子透明后观察发现,纯合的hfp108-2的胚胎在发育到心形胚后就停止发育。这些结果说明,AtcpRRF在拟南芥叶绿体的发育以及胚胎发生过程中具有重要的作用。
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