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目的:收集2016年1月1日至2017年12月31日期间,在吉林大学第二医院妇科门诊就诊及住院患者的131例宫颈活检标本,再次将收集的病理标本的HE染色及P16、Ki67免疫组化染色情况进行确认后,重新切取上述病理切片进行P16/Ki67免疫组化双重染色,并对P16、Ki67在单染及双染中的表达进行分析与比较,旨在证明P16/Ki67双染在区分宫颈LSIL与HSIL中的价值。方法:采用抗P16(H6E4)鼠单克隆抗体、Ki67抗体试剂、AP染色液等对所采集的标本进行P16/Ki67双染,并再次在显微镜下观察两者在不同程度宫颈病变的表达。采用SPSS 21.0统计软件进行数据分析,P<0.05时认为差异有统计学意义。计数资料采用卡方检验,用Kappa一致性检验分析方法对单、双染结果中P16及Ki67阳性表达的一致性进行比较。结果:本次研究一共131例宫颈病变组织,其中慢性宫颈炎组织27例,LSIL组织40例,HSIL组织64例。在炎症组、LSIL组、HSIL组的切片中,P16的阳性表达率分别为3.70%、52.50%、84.38%(P<0.05);光镜下的LSIL的组织中,P16的表达多呈散状、斑片状分布。光镜下的HSIL的组织中,P16大多数为全层、连续的表达。在炎症组、LSIL组、HSIL组中,Ki67的阳性率分别为0.00%、60.00%、89.06%(P<0.05);且光镜下的LSIL的组织中,Ki67的表达大多位于基底层及旁基底层。光镜下的HSIL的组织中,Ki67的表达大多数达到或已超过鳞状上皮中下2/3或呈高表达。在对于P16/Ki67双染中,P16、Ki67的阳性表达在炎症组、LSIL及HSIL组间的差异均具有统计学意义(P<0.05)。同时在光镜下阅片时,P16和Ki67在细胞中的着色位置及着色程度与单染无显著差别,清晰度与单染切片的差异不大。并且双染在阅片时,可以直接地观察到P16、Ki67在组织细胞中的分布及相互关系,较分别染色的多张切片更直观。我们统计了双染中P16、Ki67的共同表达中,显示P16、Ki67双染在不同程度宫颈鳞状上皮内病变的相互关系,数据表明在病变级别的增高的过程中,P16、Ki67出现共同阳性的发生率也随之增加,P16、Ki67共同阳性表达在炎症组、LSIL及HSIL组间的差异具有统计学意义(P<0.05)。经过统计学分析,统计P16、Ki67分别在单染及双染中的阳性表达,并将两种诊断方式进行Kappa一致性检验,本研究中,P16在单染及双染中的阳性表达的Kappa系数的值为0.854,说明P16在免疫组化单染及双染中的一致性良好。同时计算Ki67在单染及双染中的阳性表达的Kappa系数的值为0.826,说明Ki67在免疫组化单染及双染中的一致性良好。结论:1.P16/Ki67双染可以辅助HE染色诊断宫颈鳞状上皮内病变。2.P16/Ki67双染可以减少对LSIL的过度治疗和对HSIL的漏诊。3.P16/Ki67双染在对于宫颈鳞状上皮内病变的诊治的临床价值上,优于P16、Ki67分别染色。