海藻糖合酶基因的克隆及其遗传转化甘蔗的研究

来源 :华南热带农业大学 海南大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:mbranger
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海藻糖具有保护细胞膜和蛋白质结构的特殊功能,它能使生物体具有较强的抗旱、抗 寒的能力,且对蛋白质制品、食品具有特殊的保护作用.该文对海藻糖合酶基因进行了克隆、序列分析、植物表达载体构建及遗传转化甘蔗的研究,以期获得含海藻糖的具抗旱的甘蔗新品或能生产海藻的甘蔗新材料.从担子菌灰树花(Grifola frondosa)的菌丝体是提取总RNA并纯化出mRNA,mRNA经反转录成cDNA第一链,根据已报道的序列设计并合成一对引物,经PCR扩增灰树花的cDNA得到一约2.2kb的片段,把该片段边接互pGEM-T easy vector上进行测 序,其全长2199bp,包括起始密码和终止密码,是一个完整的阅读框架,编码732个氨基酸 .建立了甘蔗ROC10、ROC16从胚性愈伤组织→胚状体→完整植株的再生体系.利用基因枪法和农杆菌介导法分别转化甘蔗的胚性愈伤组织,最终利用基因枪法通过胚状体成苗途径获得了12株甘蔗转化植株.对转化植株的DNA进行了点杂交检测,结果12株转化植株中有9株呈阳性反应.为进一步验证点杂交的结果,又以呈阳性反应的转化植株的DNA为模榜进行PCR检测,其中有5株能扩增出与海藻糖合酶的cDNA大小相同的片段.随后又以海藻糖合酶的cDNA为 探针,对PCR结果进行Southern杂交(PCR-Southern)分析,结果表明这5株转化植株均呈阳性反应,这进一步证明海藻糖合酶基因已整合进这5株甘蔗的基因组中.
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