【摘 要】
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从吉林省长白山梯云温泉边的土样中分离得到一株产高温蛋白酶的菌株。根据其形态学特征、生理生化特性及部分长度的16SrDNA序列的研究,初步鉴定该菌株为芽孢杆菌属的一个新菌
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从吉林省长白山梯云温泉边的土样中分离得到一株产高温蛋白酶的菌株。根据其形态学特征、生理生化特性及部分长度的16SrDNA序列的研究,初步鉴定该菌株为芽孢杆菌属的一个新菌株,命名为Bacillus sp. SD-05。将该菌株分别接种到6种不同的液体培养基中,发酵后测定其高温蛋白酶酶活,确定了最佳初始液体产酶培养基,即:干酪素0.5%,Mandel A盐10%,Mandel B盐1%,pH6.0。以初始液体产酶培养基为基础,对该菌株进行最佳产高温蛋白酶的条件进行优化,结果表明最佳产酶条件为:以0.5%干酪素为最佳碳、氮源;培养基的初始pH值为6.0;接种量为0.5%;培养温度为32℃;培养时间为24h。实验表明该菌所产高温蛋白酶的92.12%都分布在细胞膜上,是一种和细胞结合的酶。对其提取条件进行研究,结果表明:用60%的异丙醇浸提菌体2h,离心后菌体再用50mmol/L的PBS振摇提取20h,为该结合酶的最佳提取方法。将粗酶液进行了超滤,盐析、透析、Sephadex G-100凝胶层析和冷冻干燥,得到单一的高温蛋白酶组分。对该酶的性质研究表明,该酶的分子量为66000Da;最适反应温度为60℃,最适反应pH8.0;在温度30-60℃,pH6.0-11.0条件下较稳定。
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