【摘 要】
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新城疫是由副粘病毒科的新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)引起的禽类急性、高度接触性的传染病,是目前危害我国养禽业最严重的疫病之一。禽流感(Avian influenza vir
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新城疫是由副粘病毒科的新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)引起的禽类急性、高度接触性的传染病,是目前危害我国养禽业最严重的疫病之一。禽流感(Avian influenza virus,AIV)是由A型流感病毒属的禽流感病毒引起的禽类的一种烈性传染病,特别是高致病性禽流感,一旦爆发,将会给中国和世界其它很多国家养禽业造成相当严重的经济损失。目前检测NDV、AIV的方法有病毒分离法、血凝(HA)和血凝抑制试验(HI)、酶联免疫吸附试验等。但这些方法存在费时、费力、操作烦琐、敏感性不高或特异性不强等缺点。 PCR是近几年发展成熟起来的一种体外基因扩增技术,具有灵敏、特异、快速、准确和易于操作等优点。多重PCR技术是一项特殊的PCR方法,它对混合感染病原体的鉴别检测只需一次PCR反应,就可同时鉴别多种病原体,这不仅节约昂贵的生物试剂,还简化了程序,加快了检测诊断速度,具有很高的临床应用价值。 本研究根据Genebank中发表的新城疫病毒和禽流感病毒的基因组序列,利用DNAStar软件分别对NDV的NP片段的基因序列、AIV的M片段的基因序列进行同源性比较,设计筛选出两对双重RT-PCR反应的特异性引物,其中一对是新城疫病毒的通用引物,扩增出大小约为550bp片段;另一对为禽流感病毒的通用引物,扩增出大小约为200bp的片段。分别建立了AIV、NDV的单一RT-PCR检测方法,并用琼脂糖电泳鉴定PCR产物,结果证明所扩增的产物均为特异性的核酸片段。在单一RT-PCR方法的基础上,进行引物浓度,退火温度等反应条件的优化
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