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研究背景功能性腹泻(functional diarrhea,FDr)是指持续地、或反复发生的出现排稀粪(糊状粪)或水样粪,且不伴有腹痛或腹部不适症状的综合征。腹泻症状出现至少6个月,且前3个月症状符合诊断标准,经检查未发现胃肠器质性改变。FDr是临床常见的功能性消化系统疾病,以肠道功能失调为主要临床表现,属于全身功能性失调疾病。我国的发病率为1.54%,在亚洲处于较高水平,难治愈,给患者和社会带来了巨大的经济和医疗负担,严重影响患者的生活质量。功能性腹泻的发病机制尚不完全明确,但主要与胃肠动力异常、内脏感觉功能异常、肠道离子转运失常、肠道菌群失调、胃肠激素及脑肠轴作用异常、社会心理因素、遗传因素及饮食因素等相关。但对于确切的发病机制仍缺乏足量的研究,故仍需要我们在此方向进行深入挖掘。功能性腹泻尚无明确的分类,但与腹泻的分类方法相同。按照其病程的长短可分为慢性腹泻、急性腹泻;按照其发病机制可分为:分泌性腹泻、渗出性腹泻、渗透性腹泻和胃肠动力性腹泻。虽发病机制不尽相同,但最终都会导致肠道水和电解质的吸收和(或)分泌失衡,从而导致腹泻。肠道水和电解质的吸收和(或)分泌失衡,是经由转运蛋白实现的,故我们将着重研究腹泻过程中转运蛋白的变化。因腹泻的发病机制尚不完全明确,故现代医学缺乏行之有效的治疗手段,多以对症治疗为主,如选用吸附止泻药调节异常的离子转运,微生态制剂调节肠道菌群,肠道运动抑制剂减缓肠道蠕动,抗抑郁焦虑药改善患者的精神社会压力等。临床疗效差,易反复,不能解决患者的问题,亟待发现新的治疗方法。功能性腹泻属于中医“泄泻”的范畴。中医认为感受外邪、情志失调、饮食不节、久病体虚、先天禀赋不足皆可导致该病的发生。发病部位在肠,同时与脾、胃、肝、肾等多脏腑相关。病理因素为湿,脾虚湿盛,则运化不健。故中医治疗的基本原则为健脾化湿,同时兼顾各脏腑之间的相互影响,使脏腑之间互相协调,恢复其正常的生理功能,从根本上改善患者的症状。参苓白术散是治疗功能性腹泻脾虚证的经典代表方,具有健脾益气,利湿止泻的作用,既可以治疗功能性腹泻,又可改善机体的消化吸收能力。参苓白术散在改善肠道离子转运的机制尚不明确,本研究从肠道转运蛋白入手,研究参苓白术散对其的影响,探讨参苓白术散在肠道离子分泌转运异常中的作用。研究目的观察参苓白术散对功能性腹泻脾虚证模型大鼠结肠上皮细胞转运蛋白的影响,探析其健脾止泻的作用机制研究内容SPF级Wistar 42日龄大鼠60只,(200±5)g。使用随机分组法将大鼠分为正常组、模型组,阳性药组、参苓白术散高、中、低剂量组,共6组,每组10只。正常组正常喂养,其余5组用高乳糖饲料连续喂养14天,同时每日22:00至次日7:00将大鼠放在特制长方形水槽里的小平台上,平台周边注水,连续14天的方法造模。在此期间,观察大鼠的一般情况及体重、进食量、饮水量、抓力、粪便含水量等。造模成功后,按10l·kg-1以大鼠体重给药,正常组给生理盐水,模型组不给药,阳性药组给蒙脱石散,中药组给参苓白术散高、中、低剂量灌胃7d。治疗完成后,取各组大鼠的心尖血、远端结肠组织,用比色法或ELISA检测血清淀粉酶、乳酸、D-木糖、5-HT含量,病理组织切片HE染色法观察大鼠结肠病理改变,使用免疫组织化学、Western blotting方法测定远端结肠组织中NHE3、GLUT2、SGLT1、5-HT4 受体、FFA3 蛋白含量。研究结果1 一般情况造模后,与正常组相比,模型组及其余4组大鼠一般状态如精神状态、灵活度等,及体重、进食量、饮水量、抓力等均明显降低,差异有统计学意义(p<0.05),且腹泻率均为100%;与模型组相比,其余各组大鼠间的指标差异无统计学意义(p>0.05)。治疗后,与正常组相比,西药组、中药高、中、低剂量组体重虽不同程度的增加,但体重、进食量、饮水量、抓力等均未恢复正常水平,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,西药组、中药高、中、低剂量组体重均明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);中药高、中、低剂量组进食量、饮水量均明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);中药高、中剂量组抓力明显增高,差异有统计学意义(P<0.05)。西药组、中药高、中剂量组均未再出现腹泻,低剂量组12.56%的大鼠存在腹泻。与西药组相比,中药中剂量组体重、进食量明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);中药高、中剂量组饮水量明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。2血清学指标与正常组相比,模型组血清淀粉酶含量虽无差异无统计学意义(P>0.05),但含量升高;模型组血清D-木糖含量虽无差异无统计学意义(P>0.05),但含量降低;模型组血清乳酸、5-HT含量皆明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组相比,中药高、低剂量组大鼠血清淀粉酶含量明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),中药高、中、低剂量组大鼠血清D-木糖含量明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);西药组、中药高、中、低剂量组血清乳酸、5-HT含量明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与西药组相比,中药高、中、低剂量组大鼠血清淀粉酶、D-木糖、乳酸、5-HT含量差异均无统计学意义(P>0.05)。3 HE染色远端结肠常规病理显示:各组大鼠远端结肠粘膜组织结构基本正常,模型组、西药组、中药低剂量组三组远端结肠均有轻微充血,未见明显中性粒细胞浸润和间质水肿,正常组、中药高、中剂量组远端结肠组织未见明显异常。4 结肠组织 NHE3、GLUT2、SGLT1、5-HT4 受体、FFA3 的表达4.1免疫组化半定量结果与正常组相比,模型组远端结肠纳-氢交换体3(Na+/H+exchanger3,NHE3)、葡萄糖转运体2(GLUT2)、钠依赖性葡萄糖转运体(SGLT1)表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);模型组的5-HT4受体、游离脂肪酸受体3(Free fatty acid receptor 3,FFA3)表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,西药组、中药高、中、低剂量组NHE3、SGLT1表达无明显差异(P>0.05);中药高、中、低剂量组GLUT2表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);中药高、中、低剂量组5-HT4受体表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);中药高、中剂量组FFA3表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与西药组相比,中药高、中、低剂量组NHE3、GLUT2、SGLT1、5-HT4受体、FFA3的表达无明显差异(P>0.05)。4.2 Western blotting 结果与正常组相比,模型组NHE3、GLUT2、SGLT1表达明显降低,差异有统计学意义(Pm0.05);模型组的5-HT4受体、FFA3表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,西药组、中药高、中、低剂量组NHE3、GLUT2、SGLT1表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);西药组、中药高、中、低剂量组5-HT4受体、FFA3表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);与西药组相比,中药高剂量组GLUT2表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。研究结论1参苓白术散不仅可以发挥止泻作用,还可以改善功能性腹泻脾虚证模型大鼠的毛发、精神状态、灵活度等,促进体重的增长,提高大鼠的进食量、饮水量,增加大鼠的抓力。2参苓白术散及可以改善功能性腹泻脾虚证模型大鼠肠道的吸收功能,提高D-木糖吸收率,降低血清乳酸浓度,缓解肢体酸痛。3参苓白术散可以降低功能性腹泻脾虚证模型大鼠血清5-HT浓度。4参苓白术散可以上调NHE3、GLUT2、SGLT1的表达,下调5-HT4受体、FFA3的表达,来调节结肠对水、电解质的分泌与吸收,从而达到止泻的作用。