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目的:瘢痕疙瘩是一种瘢痕异常增生性疾病,病理变化以成纤维细胞增殖和细胞外基质大量沉积为主要特点,病变能向周围正常皮肤扩展,具有类似于恶性肿瘤的侵袭性和易复发性。目前对于瘢痕疙瘩发生发展的具体分子生物学机制缺乏统一的结论。上皮间质转化现象是分化成熟的上皮细胞转变成为间质细胞的过程,存在于很多恶性肿瘤中,并被证明与肿瘤的侵袭转移有关。相关研究已经证实在瘢痕疙瘩组织中存在上皮间质转化现象,低氧诱导上皮角化细胞能够促进HIF-1α的表达并促进上皮间质转化现象发生。lncRNA是长度大于200个nt的非编码RNA。lncRNA能够从多个层次参与基因表达调控,从而广泛参与各种疾病的发生和转变。相关研究也报道了瘢痕疙瘩组织中存在异常表达的lncRNA。然而异常表达的lncRNA对瘢痕疙瘩发生发展的具体影响及作用机制仍然缺乏足够的研究。本研究从瘢痕疙瘩上皮间质转化现象的角度,通过上皮间质转化特异性lncRNA芯片筛选瘢痕疙瘩组织中与上皮间质转化现象相关的lncRNA,并通过低氧诱导上皮角化细胞探索lncRNA参与瘢痕疙瘩发生发展的具体分子生物学机制。方法:在本研究中,我们收集了 15对瘢痕疙瘩组织与邻近正常皮肤组织标本。取其中3对提取标本总RNA后合成cDNA,利用LncPath Human EMT Pathway Microarrays芯片检测上皮间质转化相关lncRNA表达谱。分析芯片检测结果筛选出异常表达的lncRNA在3对原样本中进行qPCR验证。根据原样本验证结果挑选lncRNA在12对扩大样本中进行qPCR验证,从而挑选出瘢痕疙瘩组织中与上皮间质转化相关的异常表达lncRNA。然后取人上皮角化细胞分为常氧组、低氧组、sh-lncRNA组和sh-control组,常氧组在正常氧气条件下培养,低氧组在低氧条件下培养,sh-lncRNA组转染shRNA抑制lncRNA表达后在低氧条件下培养,sh-control组转染sh-control后在低氧条件下培养。干预处理后利用qPCR技术和western blotting技术检测上皮角化细胞内HIF-1α、E-cadherin、Vimentin表达,利用流式细胞术检测细胞凋亡情况,利用Transwell技术检测细胞迁移能力,利用双荧光素酶报告基因检测lncRNA与HIF-1α的表达关系。结果:利用LncPath Human EMT Pathway Microarrays芯片检测3对瘢痕疙瘩组织与正常皮肤组织lncRNA表达谱,以相对表达量变化>1.5、P值<0.05为标准筛选出异常表达lncRNA共11个,其中7条上调,4条下调,同时找到异常表达mRNA18条,其中14条上调,4条下调。从11条异常表达lncRNA中选择8条在3对原样本中进行qPCR验证,结果有ENST00000563754、NR002605、NR033321、TCONS00002241差异具有统计学意义。我们选择NR002605、NR033321、TCONS00002241、ENST00000437232 和 HOTAIR 在 12 对扩大样本中进行 qPCR 验证,结果 NR002605、NR033321、TCONS00002241 表达差异与芯片结果一致且差异具统计学意义。在低氧诱导条件下,上皮角化细胞内HIF-1α和Vimentin表达升高,E-cadherin表达降低,细胞迁移能力增强,细胞凋亡率下降,而抑制lncRNAHOTAIR的表达能够抑制这一现象。双荧光素酶报告基因检测显示HOTAIR参与调控HIF-1α表达。结论:通过上皮间质转化特异性lncRNA芯片检测和qPCR验证,我们发现了瘢痕疙瘩组织中与上皮间质转化相关的lncRNA。我们还发现了 lncRNA HOTAIR在瘢痕疙瘩上皮间质转化过程中起着重要的作用。HOTAIR可能通过HIF-1α信号通路参与调控上皮角化细胞上皮间质转化现象,从而进一步参与瘢痕的形成和侵袭性进展。