目的:Rho/Rho激酶(Rock)信号途径是机体中普遍存在的信号转导通路,参与调控细胞的增殖、粘附、移行等,被认为是控制细胞行为的上游信号分子。近来研究发现许多神经病理状态均有Rock的激活,而应用Rock抑制剂可改善临床症状和病理状况。本实验应用Rho激酶抑制剂Fasudil治疗C57BL/6小鼠EAE,观察其临床疗效和潜在的免疫学机制,目的在于探讨EAE的发病机制和应用Fasudil治疗EAE的作用机制,为EAE和MS的免疫病理机制提供新的理论支持,也为今后临床应用Fasudil辅助治疗MS等CNS自身免疫性疾病提供实验依据。方法:雌性C57BL/6小鼠随机分为EAE组20只,Fasudil干预组20只,佐剂组20只。EAE和Fasudil干预组用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(MOG35-55)进行免疫,建立EAE模型,佐剂组以等量生理盐水代替MOG35-55作为EAE组的对照。Fasudil干预组于免疫后第7天腹腔注射Fasudil(50mg/kg/d),连续治疗14天。EAE组和佐剂组给以等量生理盐水作为对照。免疫后隔天观察各组动物体重变化和发病情况,并按国际通用标准评定临床症状。在免疫后4周处死动物,取小鼠脊髓腰膨大处,行HE染色、Luxol Fast Blue染色及间接免疫荧光染色,观察各组小鼠病理变化及Rock-Ⅱ的表达情况。实验数据采用SPSS13.0软件进行分析。结果:1.利用MOG35-55多肽成功地诱导了C57BL/6小鼠EAE模型。EAE组发病率100%(n=20),平均起病时间为13.35±1.31天,高峰期平均症状评分3.80±0.78,高峰期平均体重15.75±0.81。在发病后第12天开始相继出现明显的临床症状,发病轻重不一,首先表现为进食减少,活动量减少,皮毛不光滑,体重减轻,尾部无力下垂,随病情加重出现一侧后肢瘫痪,进一步发展为双侧后肢瘫痪,不能自主翻身,严重者伴有前肢瘫痪,最高评分达到4分。Fasudil干预组发病率35%(n=20),较EAE组降低;平均起病时间15.55±1.50天,较EAE组明显延迟(P<0.01);高峰期平均症状评分2.24±0.26,较EAE组降低(P<0.05);高峰期平均体重19.56±0.66,与EAE组相比差异显著(P<0.05)。这4项临床指标比较,Fasudil干预组与EAE组均有统计学差异。佐剂组未见发病,体重持续增加。2.HE染色结果显示,EAE组小鼠出现明显炎性细胞浸润, Fasudil干预组和佐剂组则炎性浸润较轻,EAE组、Fasudil干预组和佐剂组Okuda炎性细胞浸润评分呈明显差异。EAE组炎性细胞浸润评分3.25±0.56,Fasudil干预组2.13±0.44,佐剂组1.38±0.78。EAE组和Fasudil干预组、EAE组和佐剂组比较均有统计学意义(P<0.05)。Luxol Fast Blue染色显示,EAE组髓鞘脱失较Fasudil干预组和佐剂组更明显,且与病情的严重程度呈正相关。3. Rock-Ⅱ在EAE组、Fasudil干预组和佐剂组脊髓中均有表达,且表达情况与小鼠的病情轻重程度和临床评分相一致,在EAE组血管内皮细胞明显表达。观察同一视野脊髓内Rock-Ⅱ阳性细胞的数量,EAE组小鼠为31.78±1.04,Fasudil干预组20.22±1.56,佐剂组为18.50±1.39,EAE组和Fasudil干预组、EAE组和佐剂组相比较有统计学差异(P<0.01)。结果表明Fasudil干预组Rock-Ⅱ的表达明显低于EAE组。结论:1.用MOG35-55抗原乳剂免疫C57BL/6小鼠,可成功建立EAE模型。2.Rho/Rock信号通路的激活与EAE发病有关。3.Rock抑制剂——Fasudil能够降低EAE的发病率,缓解EAE临床症状,减轻炎性细胞的浸润和髓鞘脱失。4. Rock抑制剂――Fasudil减少EAE小鼠脊髓及其血管内皮细胞Rock-Ⅱ的表达,可能是其抑制EAE的免疫机制之一。