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PDK4基因是丙酮酸脱氢酶激酶家族的成员,主要在脂肪代谢、糖酵解、三羧酸循环以及ATP形成等生理过程发挥重要作用,有研究表明PDK4基因是影响家禽脂肪沉积的重要候选基因。FGF10基因是成纤维细胞生长因子家族的一员,参与多种器官的发育和成熟过程,研究表明FGF10在白色脂肪组织的发育和代谢过程中具有重要的作用。但有关于PDK4、FGF10基因在从江香猪肌内前体脂肪细胞分化过程中是否具有调控作用尚不清楚。本研究以贵州从江香猪为试验对象,采用分子克隆、实时荧光定量PCR、细胞培养、超表达和干扰等方法,阐述了PDK4、FGF10基因组织表达特性和对从江香猪肌内前体脂肪细胞分化的影响。主要研究结果如下:1.成功克隆了从江香猪PDK4、FGF10基因CDS区,生物信息学分析得知从江香猪PDK4基因的编码区全长1224 bp,编码407个氨基酸;FGF10基因的编码区全长636 bp,编码211个氨基酸。经BLAST软件进行同源性比对,发现从江香猪PDK4基因与羊、马、人的核苷酸序列同源性分别为93%、92%、91%;FGF10基因与羊、牛、人、鼠的核苷酸序列同源性分别为94%、93%、93%、90%。2.PDK4、FGF10基因在从江香猪与大白猪不同组织中表达量的差异研究。采用qRT-PCR方法检测PDK4、FGF10基因在从江香猪与大白猪心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胃、大肠、小肠、背最长肌和脂肪组织中的表达量。结果显示:在从江香猪的不同组织中,PDK4基因在肾脏中的表达量最高,在胃和脂肪中表达量也较高,FGF10基因在胃中的表达量最高,其次是在肾脏和脂肪中表达量较高,两者均在背最长肌中的表达量最低;在大白猪的不同组织中,PDK4、FGF10基因均在脂肪中的表达量最高,PDK4基因在背最长肌中的表达量最低,FGF10基因在心脏中表达量最低。3.从江香猪肌内前体脂肪细胞的原代和诱导培养。取生长状况较好的5日龄从江香猪背最长肌组织,采用0.2%Ⅱ型胶原酶进行消化,采用差速贴壁法筛选肌内前体脂肪细胞,进行扩大培养。对肌内前体脂肪细胞进行诱导培养,qRT-PCR检测在不同诱导阶段PDK4、FGF10基因的表达情况。结果显示:成功培养了从江香猪肌内前体脂肪细胞;在诱导的早期阶段,PDK4、FGF10基因的表达量均增加,均在诱导分化48 h的表达量最高。4.探究PDK4、FGF10基因的功能。将构建成功的PDK4、FGF10基因的表达载体和干扰载体分别转染从江香猪肌内前体脂肪细胞,利用qRT-PCR的方法检测过表达PDK4、FGF10基因后脂肪代谢沉积相关基因PPARγ、ACC、ATGL、ADIPOQ、FABP4、FAS、LPL表达情况。结果显示:上调了PDK4、FGF10基因的表达量以后,ACC、FABP4、FAS、LPL、PPARγ的表达量均增加,ATGL和HSL的表达量均减少,下调PDK4和FGF10基因的表达后,相关脂肪分化关键基因ACC、ATGL、ADIPOQ、FABP4、FAS、LPL、PPARγ、HSL的表达量均降低。