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胃癌是全国范围内致死率最高的恶性疾病之一,胃癌转移是导致其高致死率的主要因素。目前对于胃癌发病机制及其治疗方面已有广泛研究,但是对于胃癌依旧没有很好的治疗方法,胃癌仍然是威胁人类生命健康的重大疾病之一。为了探讨临床胃癌转移的分子机制,寻找潜在的有效治疗胃癌的分子靶点,我们在前期工作基础上,深入研究了驱动蛋白分子KIF4A对胃癌细胞迁移侵袭的调控。研究表明,驱动蛋白分子KIF4A是保证细胞正常分裂的一个关键蛋白,KIF4A的表达异常会导致肿瘤的发生和发展。然而KIF4A参与调控肿瘤转移过程鲜见报道,我们深入研究了KIF4A蛋白分子对胃癌细胞的迁移侵袭的调控作用,进而阐明KIF4A在调控肿瘤转移过程中的分子作用机制。Supervillin (SVIL)是一种与F-actin结合的膜蛋白,为外周膜蛋白,普遍表达于人体各组织,有研究表明,SVIL在肿瘤细胞的侵袭过程中起到一定的作用,并且通过酵母双杂交实验证明了其在细胞内能与KIF4A相结合,因此猜想是否KIF4A调控肿瘤细胞转移过程的分子机制与SVIL有关,并对这一假设做了相关的实验验证。本研究工作从以下几个方面进行展开：1.我们利用脂质体2000分别转染pGPU6-GFP-KIF4A 和 pGPU6-GFP-NC质粒以及pEGFP-C1、pEGFP-KIF4A 和 pEGFP-SVIL的质粒于SGC-7901细胞中,利用G418进行筛选,构建出了KIF4A低表达SGC稳筛细胞株、KIF4A局表达SGC稳筛细胞株、SVIL高表达SGC稳筛细胞株以及两个对照细胞株,并通过Western Blot和免疫荧光染色鉴定这几个稳筛的细胞株。2.运用KIF4A低表达胃癌细胞株和KIF4A高表达胃癌细胞株分别进行划痕实验和Transwell实验,观察KIF4A对胃癌细胞SGC-7901迁移的影响。3.对KIF4A低表达胃癌细胞株和KIF4A高表达胃癌细胞株进行 vinculin染色并进行计数,应用Origin8.0软件作图,观察KIF4A对胃癌细胞SGC-7901侵袭的影响。4.分别利用IP技术和免疫荧光染色技术证明KIF4A 与 supervillin在分子和细胞水平上的结合,为进一步研究KIF4A 与 SVIL之间的相互作用奠定了基础。5.分析研究supervillin分子的功能结构域,利用分子克隆技术构建Flag-SVIL的截短突变体,进而可以研究KIF4A与supervillin的哪个功能域结合。