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口蹄疫(Foot and Mouth Disease,FMD)是一种侵害偶蹄类动物的高度传染性疾病,口蹄疫严重影响世界各国畜牧业的健康可持续发展。酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunoadsordent assay,ELISA)广泛应用于口蹄疫的诊断,传统的ELISA方法以全病毒作为包被抗原,生产过程中存在病毒扩散的风险,而将口蹄疫病毒的结构蛋白在体外表达和组装,用组装的病毒样颗粒(Virus-like Particles,VLPs)作为ELISA方法的抗原更加安全可靠。本课题开展了针对O型FMD VLPs的多克隆抗体的制备和O型FMD阻断ELISA检测方法的建立,为后续检测试剂盒的研发奠定基础。本研究将重组质粒pSMK-VP0VP3和pSMK-VP1的共转化的感受态细胞BL21(DE3)-RIL表达菌株,IPTG诱导表达融合蛋白、镍柱亲和层析纯化和酶切组装制备O型FMD VLPs,将O型FMD VLPs与佐剂混合后免疫家兔,制备兔抗O型FMD VLPs高免血清,并采用饱和硫酸铵沉淀法与亲和层析法纯化制备兔抗O型FMD VLPs多克隆抗体,采用改良过碘酸钠法制备兔抗O型FMD VLPs的酶标抗体,并初步建立检测O型FMD阻断ELISA方法。本研究成功地表达出O型FMD VLPs,纯化后的O型FMD VLPs的蛋白质浓度为0.687 mg/mL。成功地制备出兔抗O型FMD VLPs的多克隆抗体。SDS-PAGE结果可见抗体重链和轻链,大小分别为50ku和25ku。经间接ELISA法检测,效价达1:512000。表明制备出高纯度的兔抗O型FMD VLP的酶标抗体,可用于O型FMD的ELISA检测。初步建立检测O型FMD阻断ELISA方法,确定VLPs抗原最适包被浓度为0.5μg/m L,酶标抗体的最适稀释度为1:18000,最适封闭时间为45min,最适底物显色时间为15 min。特异性试验结果显示,只有O型FMD阳性血清的检测结果为阳性,其他均为阴性,表明该方法具有良好的特异性。本研究成功制备出兔抗O型FMD VLPs多克隆抗体,并初步建立检测O型FMD阻断ELISA方法,可为后续研发FMD检测试剂盒的做好铺垫,也为FMD的预防、控制及疫苗研制等进一步研究奠定了基础。