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目的 了解p53蛋白、cyclinD1和Caspase-3在人肝癌细胞株HepG2细胞上表达和定位;观察黄连素对人肝癌细胞株HepG2细胞的凋亡诱导及对其p53蛋白、cyclinD1和Caspase-3表达的影响,以进一步探讨黄连素诱导人肝癌细胞株HepG2细胞凋亡的可能机制。 方法 利用细胞培养技术制作细胞爬片,以免疫组织化学SABC法检测了p53蛋白、cyclinD1和Caspase-3在人肝癌细胞株HepG2细胞上表达和定位。将HepG2细胞培养体系分为黄连素组、阳性对照组和阴性对照组。黄连素组以不同浓度的黄连素处理;阳性对照组用不同浓度5-Fu处理;阴性对照组以细胞培养基+PBS处理。四甲基偶氮唑兰(MTT)比色法用以判断细胞的生长抑制率;免疫组织化学法用以测定p53、cyclinD1和Caspase-3的表达丰度;流式细胞术(FCM)及琼脂糖凝胶电泳法用以分析黄连素对HepG2的细胞周期及凋亡的影响。采用上述同样方法,研究黄连素对人正常肝细胞Chang Liver的生长抑制和凋亡诱导作用。 结果:(1)在人肝癌细胞株HepG2上,p53蛋白有较强的表达,主要分布于细胞核:CyclinD1表达丰度较强,主要分布于细胞核;Caspase-3的表达较少。(2)以空白对照组的生长抑制率为0,黄连素作用浓度为1.0μmol/L时,HepG2细胞在12、24、48、72h的生长抑制率(IR)分别为5.7%、8.8%、14.5%、19.6%;黄连素作用浓度为10μmol/L,HepG2细胞于12、24、48、72h的IR分别为9.6%、13.7%、19.2%、29.3%;黄连素作用浓度为100μmol/L时,HepG2细胞于12、24、48、72h的IR分别为14.3%、20.2%、29.6%、39.2%;与阴性对照组相比,各浓度组的各时间点的IR均有具有显著性升高,且呈时间-剂量依赖关系。与阳性对照组相比,上述浓度黄连素对HepG2细胞的生长抑制作用则无显著性差异。(3)免疫组织化学分析显示,经黄连素、5-Fu处理的HepG2细胞,其突变型p53、CyclinD1表达水平较阴性对照组显著降低,而Caspase-3的表达明显增强,