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目的:针对肺腺癌缺少已知肿瘤抗原和晚期患者肿瘤组织来源困难两大难题,利用建系的肿瘤细胞株与活体组织肿瘤细胞有共享肿瘤抗原的特点,自行构建RNA-DCs疫苗,诱导产生肺腺癌抗原特异性的细胞毒T淋巴细胞(cytotoxic Tlymphocytes,CTLs),探讨其对肺腺癌移植瘤裸鼠的抗肿瘤作用。方法:(1)从外周血单个核细胞(PBMCs)中诱导产生DCs,提取人肺腺癌细胞株A549总RNA电转染DCs,转染后的DCs与自体T淋巴细胞混合培养,诱导产生人肺腺癌抗原特异性的CTL(RNA-DCs-CTL)。(2)实验分为转染RNA的DCs组(RNA-DCs)、转染PBS的DCs组(PBS-DCs)和未转染DCs组(N-DCs),流式细胞术(FCM)测定混合淋巴细胞培养后不同组别CD8+T细胞比例,RT-PCR证明总RNA转染效率,3H-TdR掺入检测T细胞增殖指数以及乳酸脱氢酶(LDH)释放法测定杀伤肿瘤活性。(3)建立肺腺癌细胞株A549荷瘤裸鼠模型,过继回输混合培养后的T细胞,比较不同组别肿瘤体积的差异,计算抑瘤率,免疫组化法检测移植瘤组织中Bax、Bcl-2、COX-2和VEGF的表达,并用全自动图像分析系统分析其平均光密度值(mean optical density, MOD)。结果:(1) RNA-DCs和自体T细胞共培养后CD8+T细胞大量增殖,与PBS-DCs和N-DCs组相比差异显著(P<0.05)。(2) RT-PCR证明电穿孔法可成功使A549的总RNA转染入DCs并可使DCs表达肿瘤抗原。(3) RNA-DCs可显著刺激自体T淋巴细胞增殖,并且诱导产生肿瘤特异性CTLs,对A549细胞产生特异性杀伤作用,而PBS转染组与未转染组则无明显作用(P<0.05)。3H-TdR液闪法测得各组的cpm值分别为:阳性对照组(ConA+T细胞):17105±130,RNA-DCs组:7759±493,PBS-DCs组:2611±161, N-DCs组:2248±332,差异有统计学意义(P<0.05);(3)成功建立肺腺癌裸鼠移植瘤模型。过继回输RNA-DCs-CTL组裸鼠荷瘤体积明显小于回输PBS-DCs-T和N-DCs-T组(P<0.05),抑瘤率分别为68.53%和8.62%;(4)RNA-DCs-CTL治疗后,肿瘤组织Bax的表达显著上调,COX-2、Bcl-2和VEGF的表达显著下调。结论:1.人肺腺癌细胞细胞株A549总RNA转染DCs诱导产生的抗原特异性CTL(A549-RNA-DCs-CTL)对肺腺癌细胞裸鼠移植瘤的生长具有明显的抑制作用。2.除了细胞毒性作用外,A549-RNA-DCs-CTL的抗肿瘤作用可能与诱导肿瘤细胞凋亡和抑制肿瘤血管形成有关。