前言NZB×NZW/F1小鼠是系统性红斑狼疮(SLE)模型小鼠,我们的前期研究发现在NZW小鼠的第9号染色体有一SLE易感基因位点与IL-10RA基因连锁,其IL-10RA基因编码区序列有多处改变。G1066A密码子改变导致编码氨基酸由甘氨酸变为谷氨酸,造成承担IL-10信号转导负向调节的酪氨酸激酶JAK1和TYK2磷酸化结合模序缺失,从而不能抑制细胞免疫和炎症应答,引起一系列病理免疫过程导致SLE发病。本实验通过研究NZW型IL-10R对小鼠巨噬细胞生物功能及信号转导的影响,从而阐明其在SLE发病过程中的作用。实验方法本实验室前期构建的NZW型载体[pcDNA3.1(+)—NZW—IL-10R]和野生型载体[pcDNA3.1(+)—WILD—IL-10R]通过脂质体转染技术转染到小鼠巨噬细胞株RAW264.7,利用G418筛选高表达IL-10R的克隆,并通过流式细胞术确证。通过MTT法测定mIL-10刺激的高表达克隆增殖情况,免疫印迹方法检测信号转导蛋白表达,实时定量PCR技术测定炎性细胞因子分泌。研究结果1、mIL-10不能抑制表达NZW型IL-10R的小鼠巨噬细胞增殖。2、同样mIL-10呈现剂量依赖性促进NZW型IL-10R的RAW264.7细胞炎性细胞因子IL-1a,TNF-a分泌。3、信号转导蛋白在NZW型巨噬细胞表现为磷酸化程度降低。结论NZW型IL-10R由于其多处的基因编码区域序列改变,尤其是JAK1和TYK2磷酸化结合模序的缺失,导致IL-10与其结合后不能在小鼠的单核巨噬细胞发挥免疫抑制效应,从而不能限制炎症应答造成过度的炎症损伤,因此可能在自身免疫性疾病的发病过程中发挥重要作用。