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目的:研究苯磷硫胺(Benfotiamine)对体外高糖环境中培养的牛视网膜毛细血管内皮细胞的生长及细胞凋亡的影响。为探讨苯磷硫胺对体外高糖环境中培养的牛视网膜毛细血管内皮细胞的保护作用及其机理提供初步的实验依据。
方法:体外培养牛视网膜毛细血管内皮细胞。取第4-6代细胞分成三大组,均培养于含30mmol/L葡萄糖的DMEM培养基中。每大组又分成五个小组,分别给予五种不同浓度的苯磷硫胺(0、25μmol/L、50μmol/L、75μmol/L、10μmol/L),三个大组的细胞分别在37℃恒温箱中培养24小时、48小时和72小时。1.采用MTT法观察不同浓度的苯磷硫胺对高糖培养的牛视网膜毛细血管内皮细胞的增殖的影响。重复上述实验8次,对同组不同浓度所获得的数据进行统计学分析;对比观察并分析三个不同培养时段的结果,对不同时间组而同浓度的数据进行组间统计学分析。选取有明显统计学意义的最小的浓度。2.用流式细胞分析技术观察选定浓度的苯磷硫胺对高糖环境中培养的牛视网膜毛细血管内皮细胞的凋亡的影响。
结果:MTT法显示,一定浓度的苯磷硫胺可以降低高糖对牛视网膜毛细血管内皮细胞生长的抑制作用,且呈剂量相关。在浓度为75μmol/L时OD值具有统计学显著性差异(P<0.01)。但苯磷硫胺对牛视网膜毛细血管内皮细胞的保护作用与时间之间的关系无明显统计学差异。流式细胞分析技术显示,75μmol/L的苯磷硫胺可明显减少牛视网膜毛细血管内皮细胞的凋亡。
结论:一定浓度的苯磷硫胺对体外高糖环境中培养的牛视网膜毛细血管内皮细胞具有明显保护作用,且呈剂量相关。在苯磷硫胺浓度为75μmol/L时可达到理想的保护效果。其机制可能在于苯磷硫胺能减少血管内皮细胞的凋亡。苯磷硫胺有可能成为控制糖尿病微血管病变的有效药物。