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目的自噬在肿瘤耐药中扮演着双重角色,可以诱导细胞凋亡；但也可以通过减缓肿瘤细胞对放、化疗的反应,导致耐药。前期通过Agilent人microRNA寡核昔酸基因芯片V3,检测耐药前后microRNA表达的差异,结果发现miR-320a差异显著。已知miR-320a在某些肝细胞癌、结肠癌及泌尿系统肿瘤中表达,并与药物的敏感性相关。而且,自噬相关基因Atgl4是miR-320a的靶基因。然而,miR-320a在伊马替尼诱导GISTs耐药过程中的作用尚无报道。自噬与GISTs相关的研究也非常少,故希望通过研究miR-320a与自噬的调节关系,探究其在GISTs耐药过程中的作用。方法首先观察伊马替尼敏感及耐药组织中形态学差异；通过生物学信息库预测miR-320a的靶基因及其可能通路基因,并通过免疫组织化学法检测伊马替尼敏感及耐药组织中相关蛋白的表达差异。其次,建立人GISTs细胞耐药株GIST882R,并对GISTs882进行耐药前后的细胞增殖检测、划痕实验、细胞毒性实验等生物功能学实验确认耐药株建立成功。并且通过MDC染色法检测自噬小体形成,通过qRT-PCR检测耐药前后GISTs882细胞株miR-320a表达情况及下游相关基因表达水平变化；通过免疫细胞化学和Western Blotting检测miR-320a下游靶基因编码蛋白的表达。结果我们发现,耐药GISTs组织较敏感组织在细胞形态由梭型变成上皮型或混合型,核分裂相明显增多(P<0.05),侵袭性增强。临床标本组织芯片免疫组化染色发现：与敏感组织相较,在耐药组织中AKT、mTOR、ATG14的蛋白表达开高,而BCL-2蛋白表达降低。在GISTs细胞系中,耐药后的GISTs细胞株形态发生变化,迁移能力增强。GIST882R细胞株自噬体检测表达强于GIST882S细胞株。PCR检测发现耐药株中ATK、mTOR、ATG14基因表达均上调,BCL-2基因表达下调,免疫细胞染色和Western Blotting检测显示耐药细胞株中ATK、mTOR、ATG14的蛋白表达升高,而BCL-2蛋白表达下降,该结果与组织中的表达一致。结论1.GISTs细胞耐药后侵袭、迁移能力增强,自噬增加。2.miR-320a可能通过调控其靶基因ATG14,促进自噬从而诱导伊马替尼耐药。3.在伊马替尼耐药过程中,BCL-2/BECN1/ATG14通路及P13K-1/AKT/mTOR通路可能参与自噬的不同阶段。