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研究目的研究长链非编码RNA（Long non-coding RNA,LncRNA）浆细胞瘤多样异位基因1（Plasmacytoma variant translocation gene 1,PVT1）对肺腺癌A549细胞增殖、迁移等生物学行为的影响,为探索LncRNA PVT1在肺腺癌发生、进展中的作用提供实验依据。研究方法1.构建LncRNA PVT1低表达细胞株:合成靶向降解LncRNA PVT1的小干扰RNA（PVT1-siRNA）,利用Lipofectamine2000介导PVT1-siRNA转染肺腺癌A549细胞,实时荧光定量PCR检测细胞LncRNA PVT1的水平,验证转染效果。2.构建LncRNA PVT1高表达细胞株:合成人LncRNA PVT1过表达质粒,利用Lipofectamine2000介导质粒转染A549细胞,G418筛选出PVT1稳定高表达的细胞株,实时荧光定量PCR验证转染效果。3.实验分组:（1）未处理的正常A549细胞（空白对照）;（2）转染PVT1-siRNA的A549细胞（PVT1低表达组）;（3）转染了无意义序列siRNA（NC-siRNA）的A549细胞（PVT1低表达组阴性对照）;（4）转染了LncRNA PVT1过表达质粒载体的A549细胞（PVT1高表达组）;（5）转染了空载体的A549细胞（PVT1高表达组阴性对照）。4.CCK-8法检测细胞活力:将上述各组细胞接种至96孔板,加入CCK-8试剂,分别于12h、24h、48h、72h测定细胞在450nm波长处的吸光值,计算细胞活力。5.克隆形成实验检测细胞克隆形成能力:各组细胞接种至6孔板培养,肉眼观察到克隆后固定、染色、计数克隆数目。6.Transwell实验检测细胞迁移能力:将细胞接种于Transwell小室的上室,培养24h后固定、染色,计数透过Transwell小室膜的细胞数目。7.裸鼠成瘤实验:选取4-5周龄的BALB/c雄性裸鼠6只,分别在两侧肩胛部皮下接种空载体转染的A549细胞和过表达质粒转染的A549细胞,成瘤后每3天测量长、短径。研究结果1.CCK-8实验结果:与未经处理的正常A549细胞和NC-siRNA组A549细胞相比,LncRNA PVT1表达水平下调的A549细胞增殖活力降低,且随着培养时间的延长,细胞活力下降越明显（P＜0.01）;而PVT1过表达组A549细胞与两对照组相比,细胞活力明显升高（P＜0.01）。2.克隆形成实验结果:LncRNA PVT1敲低的A549细胞集落形成数目最少,明显低于未经处理的正常A549细胞组和NC-siRNA组,克隆形成能力减弱（P＜0.01）;LncRNA PVT1过表达的A549细胞形成了5组中最明显的细胞克隆,集落数目明显多于空载体组及空白对照组,克隆形成能力增强（P＜0.01）。3.Transwell实验结果:LncRNA PVT1敲低的A549细胞穿膜细胞数相较于两对照组明显减少,迁移能力减弱（P＜0.01）;LncRNA PVT1过表达的A549细胞穿膜细胞数目相较于对照组明显增多,迁移能力增强（P＜0.01）。4.裸鼠皮下移植瘤实验结果:过表达LncRNA PVT1的A549细胞所形成的皮下瘤生长更迅速,剥离的肿瘤组织体积更大,质量更重。研究结论1.LncRNA PVT1的表达是维持A549细胞活跃增殖的重要因素,低表达的LncRNA PVT1可以降低A549细胞株的活力,而过表达的LncRNA PVT1会促进其增殖。2.LncRNA PVT1的表达是A549细胞株维持迁移能力的重要因素,低表达的LncRNA PVT1可以减弱A549细胞株的迁移力,而过表达会增强其迁移能力。3.LncRNA PVT1的表达可以加速人肺腺癌A549细胞裸鼠移植瘤的生长。