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目的:①构建靶向阻断人胃癌SGC7901细胞Ⅲ型PI3K信号传导通路的小发夹RNA (Short Hairpin RNA,shRNA)重组质粒,观察其对靶基因PI3KC3 mRNA表达的抑制效果,并筛选出一条具有高效抑制作用的shRNA序列;②利用RNA干扰技术特异性阻断III型PI3K信号传导通路后,观察shRNA对人胃癌SGC7901细胞的增殖、凋亡和自噬的影响。方法:①选择针对人Ⅲ型PI3K信号传导通路mRNA的特异性shRNA靶序列,分别构建4个不同位点的靶向PI3KC3基因shRNA干扰的重组质粒,并采用基因测序法以确保shRNA干扰序列已正确插入载体中;②将表达shRNA的质粒转染于胃癌SGC7901细胞,利用shRNA干扰技术阻断Ⅲ型PI3K信号传导通路,分别在质粒转染第24 h、48 h、72 h后镜下观察胃癌细胞形态学变化;③在质粒转染48 h后收集细胞总RNA,采用实时荧光定量PCR技术检测目的基因PI3KC3 mRNA表达值的变化,并筛选出一条具有高效抑制Ⅲ型PI3K信号传导通路的shRNA干扰序列;④采用表达shRNA的质粒通过RNA干扰技术特异性阻断III型PI3K信号传导通路后,采用实时荧光定量PCR技术检测胃癌SGC7901细胞自噬相关基因MAP-LC3 mRNA和凋亡相关基因p53、PUMA mRNA表达值的变化。结果:①成功构建的4条靶向干扰Ⅲ型PI3K信号传导通路的shRNA靶序列,经基因测序证明shRNA已正确插入质粒载体中;②表达shRNA的质粒转染于胃癌SGC7901细胞24 h后镜下观察见细胞出现胞体皱缩、细胞间隙增宽,48 h后细胞出现明显皱缩,部分细胞脱落,72 h后见较多细胞脱落;③质粒转染胃癌SGC7901细胞48 h后行实时荧光定量PCR技术检测各组PI3KC3 mRNA表达值的变化,各shRNA干扰组的胃癌细胞PI 3KC3 mRNA表达均下调,其中shRNA靶序列(No.712)组PI3KC3 mRNA表达值下调至对照组的15.17%±2.21%(p<0.05);④表达shRNA (No.712)的质粒特异性阻断Ⅲ型PI3K信号通路后,实时荧光定量PCR技术检测显示:shRNA重组质粒转染的胃癌SGC7901细胞内自噬特异性蛋白基因MAP- LC3 mRNA表达水平下调至对照组的28.02%±2.65%;凋亡相关基因p53和PUMA mRNA的表达水平分别上调至对照组的475.62%±8.36%和180.24%±4.17%(P<0.05)。结论:①构建的shRNA重组质粒能有效抑制胃癌SGC7901细胞PI3KC3基因的表达;筛选的shRNA靶序列(5’-TCCGCTTAGACCTGTCGGATGAAGAGGCT-3’)为阻断Ⅲ型PI3K信号传导通路的最佳序列;②应用shRNA特异性阻断III型PI3K信号传导通路后,明显下调了胃癌SGC7901细胞自噬基因LC3 mRNA的表达;③shRNA特异性阻断III型PI3K信号传导通路后,使凋亡相关基因p53、PUMA mRNA的表达明显上调;④shRNA特异性阻断III型PI3K信号传导通路后,抑制自噬可能诱导胃癌细胞凋亡的发生。