【摘 要】
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目的:外源基因在生精细胞中难以表达,腮腺炎病毒(mumps virus,MuV)不能在生精细胞中复制,提示生精细胞具有抵御外源基因及MuV感染的能力,但其机制并不清楚,本论文对此进行了初步探
【出 处】
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北京协和医学院中国医学科学院 北京协和医学院 中国医学科学院 清华大学医学部
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目的:外源基因在生精细胞中难以表达,腮腺炎病毒(mumps virus,MuV)不能在生精细胞中复制,提示生精细胞具有抵御外源基因及MuV感染的能力,但其机制并不清楚,本论文对此进行了初步探讨,重点研究了自噬在其中的作用。 材料与方法:分离C57雄性小鼠不同阶段的生精细胞,利用表达荧光蛋白的腺病毒载体和腮腺炎病毒(mumps virus,MuV)感染生精细胞。实时定量RT-PCR检测基因mRNA水平的表达,Western-blot测定基因的蛋白表达水平,免疫组织化学与免疫荧光定位蛋白的分布。 结果:腺病毒荧光蛋白可以在Sertoli细胞、Leydig细胞及早期精原细胞中表达,但不能在圆形精子细胞中表达。自噬相关基因Beclin-1及LC3在生精细胞中高表达。雷帕霉素(Rapamycin,Rap)促进细胞自噬后,可以抑制Sertoli细胞和Leydig细胞表达荧光蛋白;而3-甲基嘌呤(3-Methyladenine,3MA)抑制生精细胞自噬后,可以促进圆形精子表达荧光蛋白。MuV不能在生精细胞中复制,但经3MA处理生精细胞后,MuV则可以在生精细胞中复制。 结论:生精细胞具有高水平的自噬活性,既能抑制外源基因的表达,也可以限制MuV病毒的复制。本研究为认识生精细胞的天然抗病毒防御机制提供了新思路,并且解释了为什么外源基因在生精细胞中难以表达。
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