利用复合诱变与原生质体融合提高中性纤维素酶活力的研究

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特异腐质霉(Humicolainsolens)是一株中国科学院微生物研究所于八十年代筛选获得的产中性纤维素酶的优良菌株。 通过对Humicolainsolens进行离子束注入和原生质体紫外照射复合诱变,得到正突变菌株H14-2,其CMC酶活力和滤纸酶活力分别为82.56IU/ml和5.77IU/ml,且传代后性能稳定,对中性纤维素酶的研究和生产具有积极意义。同时,对Humicolainsolens原生质体的释放方式进行了显微镜观察。 确定康宁木霉T7(TrichodermakoningiiT7)原生质体的制备及再生条件为:菌丝培养时间为18h;高渗缓冲液为0.5mol/L、NaCl,0.05mol/LPBS缓冲液,pH6.0;10mg/ml蜗牛酶酶解2h,以0.5mol/L、NaCl作为渗透压稳定剂的土豆汁再生培养基上进行再生。在该条件下,原生质体产量平均可达到3×107个/ml左右,再生率也可达到65%左右。 对Humicolainsolens与Trichodermakoningii进行原生质体融合条件的选择:采用60℃,30min热灭活TrichodermakoningiiT7原生质体后与HumicolainsolensH14-2活原生质体等量融合,融合条件为:PEG6000浓度为30%、Ca2+浓度为100mmol/L、37℃保温20min,并得到融合子。对融合子HRT-1进行传代培养性质稳定,其在菌落形态和发酵能力方面均偏向亲本Trichodermakoningii一方,同时也受到另一亲本Humicolainsolens的影响在生长速度、孢子产量、蛋白分泌量方面介于两者之间,并在中性纤维素酶方面表现了一定的滤纸酶活力。以上利用Humicolainsolens为亲本与木霉属进行融合育种的研究,对提高Humicola产中性纤维素酶能力或选育生产用产中性纤维素酶木霉属菌株具有积极意义。
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