[研究背景]随着计算机技术发展,大数据、云存储、“互联网+”等概念全面融入社会生活,开启了“大数据时代”的转型,一些对海量数据存储、处理、分析、预测的新型科技,也影响着与时俱进而发展至今的中医药学。中国中医科学院刘保延教授利用数据挖掘方法、复杂网络技术,建立了适合中医药诊疗特征的“临床科研信息一体化平台”,为总结名老中医诊疗经验提供了具有时代特色的方法与先进可行的工具。张宁主任医师为中国中医科学院望京医院肾病内科主任,国家中医药管理局肾病重点专科学科带头人,在中医药防治肾脏疾病积累了丰富的临床经验。张宁主任医师从事中医肾病临床工作近30年,积攒了大量的诊疗资料,然而,大部分资料为零散的纸质病历、处方及未经加工的电子病历,如进行系统整理、总结,凝练出深层次的学术思想,具有一定难度。面对这一庞大的知识宝库如何进行挖掘?会挖掘出什么样的用药规律?与临床应用是否一致?这是一系列亟待解决的问题。肾脏损伤发展到一定程度,成为慢性肾脏病(Chronic Kidney Disease,CKD)。CKD是以原发或继发性肾脏损伤为特征的一类临床综合征,病因多样、复杂,对于CKD的治疗,西医是以有效治疗原发疾病、消除引起肾功能恶化的可逆因素为主,目前没有针对改善肾脏功能、修复肾脏损伤结构的特效药,多为激素类、细胞毒类、环孢素A、利尿剂等药物,但由于长期应用所产生的不良反应及并发症,以及部分患者所产生的药物依赖性或不敏感性,使得病情反复发作,严重影响疗效及预后。中医药治疗慢性肾脏病有很好的临床疗效,在文献中多有报道,但因理法方药认识不统一,缺乏药效学等循证医学证据及作用机理研究,治疗方法未得到医学界公认。随着现代科技、分子生物学的发展,CKD的发病机制有了新的认识。目前,国外对于CKD的研究热点聚焦于足细胞、裂孔隔膜,足细胞、裂孔隔膜被视为肾病蛋白尿治疗的终末靶点,并成为国际上肾病治疗疗效评价指标的新趋势。国内文献尚未见有将足细胞作为药物治疗起效靶点的相关研究报道。张宁主任医师在临床治疗CKD时,应用中药可有效减轻症状蛋白尿,那么,临床经验方“愈肾方”对足细胞、裂孔隔膜的结构是否会有影响呢?对裂孔隔膜相关蛋白是否具有调控作用?基于此,本研究分为两部分进行研究,第一部分,运用基于复杂网络的数据挖掘方法进行回顾性临床研究,对真实诊疗情况下张宁主任医师治疗CKD的临床资料进行分析、挖掘,以药测证,总结出张宁主任医师治疗CKD的证治及药物配伍规律;第二部分,运用现代药理学、病理学、体视学、分子生物学等方法,对临床治疗肾病蛋白尿的经验方“愈肾方”进行动物实验研究,通过阿霉素所致肾病模型大鼠,观察愈肾方对肾小球足细胞形态结构、裂孔隔膜及相关调控蛋白分子生物学表达的影响及关联,探讨“愈肾方”改善蛋白尿的作用机制,为中医药治疗CKD提供确切可靠的科学依据。[临床研究]1.研究目的采用回顾性临床研究方法,运用数据挖掘中复杂网络分析法,对真实诊疗情况下,张宁主任医师治疗CKD的临床资料进行分析、挖掘,总结张宁主任医师治疗CKD的证治及药物配伍规律。2.研究方法2.1研究对象2014年1月-2014年12月期间,于中国中医科学院望京医院肾病内分泌科张宁主任医师专家门诊就诊的、服用汤药(草药及小包装中药自煎、代煎及颗粒剂)进行治疗并有疗效的CKD患者。2.2研究方法采用Liquorice软件,运用复杂网络分析法分析CKD核心用药及药物配伍结构,以方测法、以法测证。采用主题模型方法分析主要症状与中药之间的相关联系。3.研究结果通过对862诊次CKD患者草药处方进行分析,得出张宁主任医师治疗CKD常用中药74味。前10味药为:黄芪、茯苓、丹参、白芍、柴胡、地黄、生薏苡仁、当归、白茅根、酒大黄。前10对药对为:黄芪与茯苓、黄芪与丹参、黄芪与当归、黄芪与白芍、黄芪与地黄、石苇与黄芪、生薏苡仁与黄芪、黄芪与酒大黄、酒大黄与丹参、茯苓与当归。4.结论通过复杂网络分析法对2014年张宁主任医师门诊治疗CKD患者用药分析,总结张宁主任治疗CKD的证治思路为:治病求本,扶正为要;肝肾同源,柔肝凉血;疏风清热,活血解毒;针对兼症,对症治疗。主要治法为:补益肺脾肾,填精固元;渗湿利水道,活血泄浊;祛风解血毒,通便安神。[实验研究]1.研究目的观察“愈肾方”对阿霉素(ADR)肾病模型大鼠肾脏功能及结构的影响,并研究及其作用机制。2.研究方法2.1实验对象:SD大鼠,♂,50只。2.2分组及给药方法:按体重随机分为5组,即空白对照组(K)、模型组(M)、阳性药对照组(Y)、愈肾方大、小剂量组(D、X),每组10只。除空白组外,各组大鼠均尾静脉注射ADR4.5mg.kg-1,常规喂养7d,再次尾静脉注射ADR 3.Omg.kg-1。K组注射等量生理盐水。末次注射ADR造模后第二天,各组大鼠分别灌胃给药,灌胃体积为10mL·kg-1,阳性药对照组给予醋酸泼尼松片(9.Omg·kg-1),D、X 组分别给予愈肾方(39.6 g·kg-1 19.8g.kg-1),K 组和 M组均给予等量纯化水,给药21天。2.3观察指标:24小时尿蛋白定量、血肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)的变化,应用光镜、电镜观察肾脏组织及足细胞病理改变,并用免疫组织化学法观察内皮素-1(ET-1)、CD相关蛋白(CD2AP)的表达。3.研究结果3.1愈肾方可增加ADR肾病模型大鼠的24h尿量,并显著降低24h尿蛋白含量;3.2病理学观察可见给药组肾脏组织单位面积有效肾小球明显增加,肾小球形态饱满,塌陷病变得到有效恢复,肾小管水肿有所缓解;3.3电镜观察,融合的足细胞及消失的裂孔隔膜结构可明显恢复;3.4愈肾方可降低受损肾脏组织中ET-1及CD2AP的表达。4.结论愈肾方可增加ADR肾病模型大鼠24h尿量,减少24h尿蛋白含量,修复肾小球结构,其机理可能与拮抗ET-1分泌与CD2AP表达相关。[创新性]1.本研究利用数据挖掘复杂网络技术,对真实诊疗情况下张宁主任医师临床资料进行整理分析,总结张宁主任医师治疗慢性肾脏病证治及用药规律,在研究设计思路及方法上具有创新性;2.对临床治疗蛋白尿有效方“愈肾方”进行药理学研究,证实了中药复方具有修复足细胞、裂孔隔膜结构的作用,在研究靶点方向具有创新性,为验证中医药治疗肾病的药理实验研究方法上提供了新思路。