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目的通过对膝关节骨关节炎(Knee OA)患者关节软骨TNF-α基因启动子区甲基化状态及TNF-α蛋白表达的检测,探讨TNF-α基因启动子区甲基化异常在膝关节OA发生、发展中的作用。方法采用酚-氯仿抽提(Sodium-Bisulfite)方法处理基因组DNA,甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)方法检测TNF-α基因启动子区甲基化变化情况。采用免疫组化方法检测TNF-α蛋白表达。实验分为两组：13例健康人对照组和37例OA患者组。采用SPSS17.0统计软件进行分析,作χ2或Fisher’s确切概率法检验和Spearman等级相关分析。结果1.健康人对照组与膝关节OA患者软骨TNF-α启动子区甲基化状态比较健康人对照组与膝关节OA患者组软骨TNF-α启动子区低甲基化百分率分别为15.38%(2/13)和75.67%(28/37),经χ2检验分析,两组间的差异有统计学意义(P<0.05)。2.健康人对照组与膝关节OA患者软骨细胞TNF-a蛋白表达比较健康人对照组与膝关节OA患者组软骨细胞TNF-α蛋白阳性率分别为23.08%(3/13)和78.37%(29/37),经χ2检验分析,两组间的差异有统计学意义(P<0.05)。3.TNF-α基因甲基化及蛋白的表达与性别,年龄的关系TNF-α基因低甲基化及蛋白的表达与性别,年龄无明显相关性(P>0.05)4.膝关节OA患者软骨TNF-α基因启动子区甲基化与蛋白表达相关性分析28例TNF-α启动子区低甲基化的OA患者中,有25例蛋白表达呈现阳性；而29例TNF-α蛋白表达呈现阳性的OA患者中,有25例TNF-α启动子区呈现低甲基化,经Spearman等级相关分析,TNF-α启动子区低甲基化与蛋白的表达呈显著正相关。(r=0.467,P＜0.01)结论1.膝关节骨关节炎患者关节软骨细胞TNF-α蛋白的表达水平高于正常人。2.膝关节骨关节炎患者关节软骨TNF-α基因启动子区发生了低甲基化。3.TNF-α基因启动子区低甲基化可能导致TNF-α蛋白的过度表达,从而参与了膝关节OA的发生发展。