转TabZIP基因小黑杨的获得及抗逆性分析

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本研究利用农杆菌介导法将从极度抗旱、耐盐植物柽柳中克隆得到的TabZIP基因导入小黑杨花粉植株基因组中,然后对转基因小黑杨和非转基因对照小黑杨组培苗进行盐、重金属、旱胁迫处理,比较它们抗性的强弱,筛选出抗性优良的转基因株系。通过对小黑杨花粉植株的遗传转化,共获得3株卡那霉素抗性芽,对其进行PCR检测,结果均为阳性;进行实时荧光定量RT-PCR检测,结果显示目的基因在3个株系中均有表达量,说明外源基因在RNA水平上得到表达;进一步对3个转基因株系进行Western杂交分析,结果显示转基因株系在16.5Ku处均出现抗TabZIP抗体特异性杂交谱带,表明3个转基因小黑杨组织细胞中均有TabZIP基因表达的蛋白产物。分别对3个转基因株系进行了NaCl胁迫、重金属和干旱胁迫处理,比较逆境胁迫条件下转基因小黑杨与非转基因对照小黑杨无根组培苗高生长、叶片数、伤害指数、根生长等指标及盐胁迫后组培苗叶片分化的出芽率、叶片伤害指数,结果表明,无根组培苗用0.8%NaCl处理20d后,除了叶片数各株系间无显著差异外,各转基因株系无论是相对高生长还是生根指数均显著大于非转基因对照株系,伤害指数均显著小于非转基因株系,对照的相对生长量是11.6%,转基因小黑杨的平均相对生长量为84.8%,转基因小黑杨生根指数高于对照约1.64倍,伤害指数小于对照71.4%;转基因株系组培苗叶片在0.6%NaCl处理后,出芽率高于对照株系21.3%,叶伤害指数低于对照60.2%。以上说明,盐胁迫条件下转基因小黑杨受害程度明显小于对照,抗盐能力有所增强。0.2mmol/LCu2+胁迫30d后,转基因小黑杨平均高度高于对照31.1%,相对生长量和叶片数量与对照达到显著性差异,分别大于对照6.1倍和32.7%,伤害指数与对照也达到显著性差异,小于对照29.8%,生根指数除TB3与对照无显著性差异外,其它2个株系皆显著大于对照,平均生根指数大于对照1.93倍,分析说明TabZIP基因增强了小黑杨对重金属胁迫的抵抗能力。无根组培苗用5%PEG6000处理30d后,转基因小黑杨平均高度高于对照18.7%,相对生长量更是明显大于对照,平均叶片数转基因株系TB3最少,为6.77,对照次之,为7.33,TB1、TB2分别是8.33和8.50,伤害指数转基因株系低于对照29.6%,且平均根长是对照的2.78倍,生根指数也均大于对照,所以TabZIP基因的导入也提高了小黑杨的抗旱能力。综合以上结果,TabZIP基因的表达能够不同程度提高转基因小黑杨的抗盐、抗重金属及抗旱胁迫能力,其中TB2抗性最强,TB3次之,TB1的抗性也明显高于非转基因对照。
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