用cDNA消减杂交法克隆白血病细胞K562分化相关基因

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细胞分化是人类和多细胞生物生长发育中的一种重要方式,它通常并不是异常的和有害的。细胞分化调节的异常与许多疾病有密切的关系,如白血病通常由于造血干细胞定向分化的过程中出现异常而发生,导致细胞不能终末分化并无限增殖。研究细胞分化的机制可以阐明生命的本质规律和肿瘤发生的机制,为实现生物学过程的人为控制创造条件。克隆细胞分化相关基因可以进一步深化我们对这一生命现象的认识,并可指导肿瘤的治疗。因而克隆细胞分化相关基因具有深远的意义。 本研究利用cDNA消减杂交的方法,以Hexamethylene Bisacetamide(HMBA)诱导慢性髓系白血病细胞系K562细胞向巨噬细胞样分化这一以往研究得较少的模型,来研究细胞分化相关基因。通过cDNA消减杂交的方法,对K562细胞分化前后差异表达的基因进行了克隆,共得到64个克隆,其中53个有插入片段。利用Reverse Northern杂交的方法,证实其中39个克隆中有13个在分化前后表达有差异。对部分克隆测序和同源性比较后,发现8个为已知基因,6个为新基因。在已知基因中,有4个已有报道证实在白血病细胞分化前后有差异表达。其余4个已知基因中有3个功能本身并不确定,另一个EWS基因与细胞分化的关系未见报道。6个新基因克隆中有2个完成全长cDNA的测序,其中13号包含一个完整
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