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目的SD大鼠PMP22CD是通过电子克隆的方法获得的一新基因,NCBI基因登录号AY—634367,已成功克隆了此基因,其功能尚未被研究,拟对其功能进行初步探索。方法首先通过生物信息学分析了解PMP22CD基因和编码蛋白质的基本信息;构建原核表达重组质粒PET-32a(+)/PMP22CD,在大肠杆菌BL21(DE3 Lysis)中诱导表达融合蛋白,应用纯化的融合蛋白免疫新西兰大白兔,制备PMP22CD多克隆抗体;其次应用RT-PCR技术研究其在组织中的空间和时间表达谱,同时应用组织原位杂交和免疫组化方法分别在mRNA水平和蛋白水平研究PMP22CD在睾丸组织细胞中的表达情况;最后通过构建PEGFP-C1/PMP22CD野生型和突变型重组质粒,转染HeLa细胞48h后,激光共聚焦观察荧光分布,研究PMP22CD亚细胞定位和N-端信号锚定序列对PMP22CD蛋白定位的影响。结果PMP22CD具有四个外显子,ORF为696bp,定位于染色体8q22,编码的蛋白含有231个氨基酸残基,具有四次跨膜螺旋,可能定位于内质网膜,C-端具有磷酸化位点,与家族中其他成员的亲缘关系较远。成功构建原核表达重组质粒PET-32a(+)/PMP22CD,在大肠杆菌BL21(DE3 Lysis)中获得表达,融合蛋白主要以包涵体的形式存在,采用电洗脱的方法纯化融合蛋白后免疫新西兰大白兔获得抗血清,琼脂糖双向扩散试验和Western Blot显示抗体具有一定的效价和特异性。表达谱显示PMP22CD特异性得表达于13月龄以后的睾丸组织。原位杂交与免疫组化结果显示PMP22CD主要表达于14月龄大鼠睾丸组织各级精母细胞,在成熟的精子细胞未见其表达,显示出生殖细胞表达时空特异性。野生型PEGFP-C1/PMP22CD表达的HeLa细胞,荧光主要聚集于细胞核周围,呈颗粒状分布,突变型PEGFP-C1/PMP22CD表达的HeLa细胞,荧光弥漫性的分布于整个细胞浆中,颗粒状的分布形式消失。结论PMP22CD特异性的表达于13月龄以后的大鼠睾丸组织的各级精母细胞,成熟的精子细胞未见表达;编码的蛋白位于细胞浆,可能定位于内质网膜,N-端的信号锚定序列对蛋白定位具有重要的作用;制备了PMP22CD兔抗鼠的多克隆抗体,并成功用于免疫组化和Western Blot。