RELMβ调控信号通路Ca2+/Calcineurin/NFATc3对低氧性大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖的作用及机制研究

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目的:研究RELMβ是否调控Ca2+/Calcineurin/NFATc3信号通路促进低氧性大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖。方法:实验共分为两个部分:(1)第一部分:低氧,干扰RELMβ对RELMβ、Calcineurin、NFATc3表达和肺动脉平滑肌细胞增殖的影响:设计分组为1、常氧组2、低氧组3、慢病毒空载常氧组(简称空载常氧组)4、慢病毒空载低氧组(简称空载低氧组)5、慢病毒沉默RELMβ后常氧组(简称沉默常氧组)6、慢病毒沉默RELMβ后低氧组(简称沉默低氧组)7、慢病毒过表达RELMβ常氧组(简称过表达常氧组)8、慢病毒过表达RELMβ低氧组(简称过表达低氧组)。Western blot印迹和QT-PCR方法检测RELMβ、钙调磷酸酶、NFATc3的表达水平,EDU法检测rPASMCs的增殖。(2)第二部分:RELMβ对Ca2+/Calcineurin/NFATc3信号通路以及肺动脉平滑肌细胞增殖的影响:设计分组为1、对照组2、RELMβ蛋白组3、加BAPTA-AM(Ca2+螯合剂)和重组RELMβ蛋白组4、加环孢素A(Calcineurin抑制剂)和重组RELMβ蛋白组。Western blot印迹和QT-PCR方法检测钙调磷酸酶、NFATc3的表达,EDU法检测大鼠肺动脉平滑肌细胞的增殖。结果:(1)第一部分:低氧、干扰RELMβ对RELMβ、Calcineurin、NFATc3表达和肺动脉平滑肌细胞增殖的影响。低氧组较常氧组RELMβ、Calcineurin、NFATc3 mRNA和蛋白表达增加,差异有统计学意义(P<0.05)。过表达常氧组较空载常氧组RELMβ、Calcineurin、NFATc3mRNA和蛋白表达均增加,细胞增殖率增加,差异有统计学意义(P<0.05)。沉默常氧组较空载常氧组RELMβ、Calcineurin、NFATc3 mRNA和蛋白表达均减少,细胞增殖率减少,差异有统计学意义(P<0.05)。沉默低氧组较空载低氧组RELMβ、Calcineurin、NFATc3 mRNA和蛋白表达均减少,细胞增殖率减少,差异有统计学意义(P<0.05)。过表达低氧组较过表达常氧组RELMβ、Calcineurin、NFATc3 mRNA和蛋白表达均增加,细胞增殖率增加,差异有统计学意义(P<0.05)。过表达低氧组较空载低氧组RELMβ、Calcineurin、NFATc3 mRNA和蛋白表达均增加,细胞增殖率增加,差异有统计学意义(P<0.05)。过表达低氧组较沉默低氧组RELMβ、Calcineurin、NFATc3 mRNA和蛋白表达均增加,细胞增殖率增加,差异有统计学意义(P<0.05)。过表达常氧较沉默常氧组RELMβ、Calcineurin、NFATc3 mRNA和蛋白表达均增加,差异有统计学意义(P<0.05)。空载低氧组较空载常氧组RELMβ、Calcineurin、NFATc3 mRNA和蛋白表达均增加,差异有统计学意义(P<0.05)。沉默低氧组较沉默常氧组RELMβ、Calcineurin、NFATc3mRNA和蛋白表达无明显变化,细胞增殖率无明显变化,差异无统计学意义(P>0.05)。(2)第二部分:RELMβ对Ca2+/Calcineurin/NFATc3信号通路以及肺动脉平滑肌细胞增殖的影响。RELMβ蛋白组较对照组Calcineurin、NFATc3 mRNA和蛋白表达增加,细胞增殖率增加,有统计学意义(P<0.05)。加BAPTA-AM(Ca2+螯合剂)和重组RELMβ蛋白组较RELMβ蛋白组Calcineurin、NFATc3 mRNA和蛋白表达减少,细胞增殖率减少,有统计学意义(P<0.05)。加环孢素A(Calcineurin抑制剂)和重组RELMβ蛋白组较RELMβ蛋白组,NFATc3 mRNA和蛋白表达减少,有统计学意义(P<0.05),Calcineurin mRNA和蛋白表达减少,有统计学意义(P<0.05),细胞增殖率减少,有统计学意义(P<0.05)结论:1、低氧促进RELMβ、Calcineurin、NFATc3的表达,并可引起大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖。2、RELMβ可能通过Ca2+/Calcineurin/NFATc3信号通路促进大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖。
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