【摘 要】
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该文采取定位侯选策略,在染色体3p的高频缺失区域中选取与癌症有关的候选基因,对候选基因在鼻咽癌组织和细胞系中进行了广泛地突变和表达检测,并进一步对在鼻咽癌中发生高频
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该文采取定位侯选策略,在染色体3p的高频缺失区域中选取与癌症有关的候选基因,对候选基因在鼻咽癌组织和细胞系中进行了广泛地突变和表达检测,并进一步对在鼻咽癌中发生高频变异的候选基因进行启动子甲基化分析和功能研究,以期寻找和鉴定定位在3号染色体短臂上的、与鼻咽癌发生,发展有关的抑癌基因.采用PCR-直接测序方法对除DUTT1、MLH1和PTPRG之外的其他17个3p候选基因在21例鼻咽癌组织和2例鼻咽癌细胞系CNE2、SUNE1中进行了突变检测.利用半定量RT-PCR方法对3p候选基因在鼻咽癌中的表达状况进行了分析.对在鼻咽癌中携带序列变异Gly160Arg(G160R),并且发生高频表达下调的BLU基因,扩大样本量对其变异频率和G160R位点的变异性质进行了分析.通过体外转染实验对BLU基因在鼻咽癌细胞中的抑癌功能进行了初步研究.采用RT-PCR方法从1例鼻咽慢性炎组织中钓取了包含完整读码框的BLU基因全长cDNA,将其克隆入pcDNA3质粒构建成野生型BLU基因真核表达载体.利用重叠PCR方法介导的定点突变技术,分别构建了缺失MYND结构域、携带Ser402Phe点突变及缺失第405、406位Cys和Ser、以及携带Glyl60Arg序列变异的三种BLU基因突变体的真核表达载体.将野生型BLV基因和MYND缺失突变体瞬时转染鼻咽癌细胞系CNE2,用TUNEL方法观察转染细胞的凋亡情况;用流式细胞仪检测转染细胞的细胞周期.总之,对3p高频LOH区域的候选基因进行的系统的突变和表达分析为进一步理解3p基因在肿瘤细胞中的作用机制,以及最终分离和鉴定3p鼻咽癌抑癌基因打下了基础.
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