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宫颈癌是妇科常见的恶性肿瘤,高危型人乳头瘤病毒(high risk-human papillomavirus,HR-HPV)的持续感染是导致宫颈病变的主要致病因素。在感染后2年内大多女性可转归为正常,极少数女性发展为持续性HPV感染。大量研究证明HR-HPV持续感染的前提条件即HPV DNA片段整合入宿主宫颈上皮细胞基因组中,通常HPV一过性感染患者极少发生HPV DNA片段的整合。HR-HPV通过微小损伤感染宿主,在外界致癌因素刺激下癌基因E6E7DNA整合入宿主宫颈上皮细胞内造成E6E7表达失调控,被激活的E6E7DNA进而转录为E6E7mRNA,并持续生成癌蛋白E6E7,而癌蛋白E6E7分别作用于抑癌蛋白P53与pRb,导致二者失活,引起宫颈上皮细胞恶性转化。近年FDA通过认证了Aptima法检测HPV E6/E7mRNA片段,HPV E6/E7mRNA检测现已成为宫颈癌筛查重要手段。HPV E6/E7mRNA检测与HPV DNA检测两种检测方法进行比较,不难得出HPV DNA检测侧重于机体感染了HPV,HPV E6/E7mRNA检测则不仅体现了HPV持续感染,而且在某种程度上可反映HPVE6/E7癌基因蛋白表达和宫颈病变活跃程度。HPV E6/E7mRNA检测结果为阳性,可提示HPV DNA已整合入宿主细胞内并启动了转录,反之,提示HPV DNA未整合到宿主细胞内,处于游离状态。 越来越多的证据表明大部分女性在接触HPV后转归为正常的原因可能在于大多健康女性在自身免疫系统监视和防御下清除了病毒。人类免疫系统分为两类,一类是先天性免疫应答,由组织屏障、固有免疫细胞和固有免疫分子组成。作为机体的第一道防线,在HPV感染早期发挥着非特异性作用。另一类是适应性免疫应答,是机体的第二道防线来防止病毒的再感染。适应性免疫应答包括辅助性T(Th)1型细胞参与的细胞免疫和Th2型细胞介导的体液免疫,尤其是细胞免疫在抗肿瘤、抗病毒中起重要作用。两类免疫系统相互作用、相互协调,在抵御病原体和预防疾病进展中发挥着不可或缺的功能。宫颈暴露于阴道微环境中,而机体阻止病毒侵袭和清除的关键性防御措施在于有效的免疫应答,因此,阴道局部免疫状态与HR-HPV的感染及转归密切相关。 目的: 本研究通过单因素分析研究对象的年龄、吸烟史、初次性生活年龄等临床一般资料与HR-HPV感染相关性,并采用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测阴道灌洗液中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素(interleukin,IL)-12、IL-10的表达水平,探讨不同HR-HPV感染状态的患者的阴道局部免疫状态变化,为今后HR-HPV持续感染的预防及治疗提供新的思路。 方法: 1.选取2017年10月至2018年4月就诊于我院妇科门诊已行HPV DNA检测、HPV E6/E7mRNA检测及液基细胞学检查,且细胞学诊断结果为阴性的患者90例。根据HPV检查结果将所纳入的研究对象进行分组,分别为HPV E6/E7mRNA+/DNA(+/-)组(30例)、HPV E6/E7mRNA-/DNA+组(30例)和HPV E6/E7mRNA-/DNA-组(30例),通过医务人员一对一调查问卷形式详细记录研究对象年龄、吸烟史、孕产次、初次性生活年龄、是否使用避孕套、性伴侣数量等一般情况,进行单因素统计学分析了解临床一般资料与HR-HPV感染的相关性。 2.采用酶联免疫吸附实验检测及比较不同组间阴道灌洗液中TNF-α、IL-12、IL-10的表达情况,进而比较HPV E6/E7mRNA+/DNA(+/-)组中不同HPV分型患者的细胞因子表达情况。 统计学分析 采用SPSS21.0统计软件对数据进行统计分析。符合正态分布的年龄用((X)±S)表示,所有研究对象的临床一般资料与HR-HPV感染的相关性分析采用x2检验。阴道灌洗液中各细胞因子的浓度以中位数(四分位数)表示,采用Kruskal-WallisH检验分析不同HR-HPV感染状态下细胞因子表达水平的差异,组间两两比较采用Bonferroni法分析。检验水准取双侧α=0.05。 结果: 1.所纳入的30名HPV E6/E7mRNA+/DNA(+/-)患者平均年龄为(45.00±8.95)岁,30名HPV E6/E7mRNA-/DNA+患者平均年龄是(43.40±8.41)岁,30名HPV E6/E7mRNA-/DNA-平均年龄则为(43.33±7.81)岁,单因素分析三组研究对象的临床资料(年龄、吸烟史、初次性生活年龄、孕产次、是否使用避孕套、性伴侣数量)与HR-HPV感染无明显相关性(P>0.05)。 2.相对于其它各组,HPV E6/E7mRNA+/DNA(+/-)组中IL-10浓度明显升高,TNF-α、IL-12浓度明显降低(P<0.0167),TNF-α、IL-12和IL-10在HPVE6/E7mRNA-/DNA+组和HPV E6/E7mRNA-/DNA-组比较中的浓度均无明显差异(P>0.0167)。 3.在HPV E6/E7mRNA+/DNA(+/-)组中,不同HPV分型患者的TNF-α、IL-12、IL-10浓度差异无统计学意义(均P>0.05)。 结论: 1.HR-HPV持续感染与阴道局部免疫状态改变具有相关性。 2.HR-HPV分型与阴道局部免疫状态改变无相关性。 3.通过改变阴道局部免疫状态可能为今后HR-HPV持续感染防治提供新的思路。