血红蛋白(Hemoglobin，Hb)是红细胞中大量存在的一种蛋白质，其结构分别具有两条α链和两条β链，为四聚体。每个亚单位由一条肽链及一分子血红素组成。Hb在哺乳动物体内的主要功能为运输氧气和二氧化碳，以及调节血液pH值[1]。除此之外，能与许多内源性、外源性物质发生相互结合。黄酮类小分子普遍具有抗菌、抗病毒、抗氧化等生物活性，是人们广泛研究的生药活性成分。黄酮类物质在体内一般难于吸收，而且在体内很快进入Ⅱ相反应(结合反应)，变为极性大、亲水性的结合型药物，因此，其自身原型药物在体内的循环浓度是极低的[2]。有报道[3，4]称体内槲皮素和白藜芦醇能与红细胞的细胞膜结合，进而与血红蛋白结合，这些结合型药物是具有生物活性的[5]，它们在体内能有效地避免一些酶类物质对其干扰，另外，结合型药物延长了药物经过代谢和排泄的消除时间，延长了药物在体内存在时间。本论文研究Hb与黄酮类小分子的相互作用，对于在分子水平探讨药物的药效、作用机理等内容具有重要意义，是体内药代动力学研究的必要补充。　　目的：研究黄酮类小分子与Hb相互作用的光谱特征以及变化，讨论二者间相互作用的猝灭机制、结合常数和结合位点数、非辐射能量转移距离、相关热力学参数，以及Hb产生构象变化的光谱信息，并考察体内常见金属离子Fe2+和日常营养物质Vitamin C对二者相互作用的影响。　　方法：在模拟人体生理pH值环境下，结合采用紫外-可见光谱法和荧光光谱法，分别在室温(298K)及正常生理温度(310K)的两种温度条件下研究八种黄酮小分子(野黄芩苷、黄芩苷、木犀草素、金丝桃苷、木犀草苷、芹菜素、金合欢素、金合欢苷)与牛血红蛋白(BHb)的相互作用；讨论其相互作用的猝灭机制，通过计算得出结合常数和结合位点数；通过叠加图谱积分面积求非辐射能量转移距离；利用热力学方程式判断作用力类型；采用同步荧光分析法和三维荧光技术探讨BHb构象的变化情况；在298K条件下，测定Fe2+和Vitamin C对该结合反应结合常数的影响以及BHb构象变化。　　结果：黄芩苷、木犀草素、木犀草苷、芹菜素、金合欢素分别以动态猝灭方式猝灭BHb自身产生的荧光，野黄芩苷、金丝桃苷、金合欢苷以静态猝灭方式猝灭体系荧光。它们的结合常数大小顺序依次为：野黄芩苷、黄芩苷、木犀草素、金丝桃苷、木犀草苷、芹菜素、金合欢素、金合欢苷，数值依次为(L·mol-1)：1.28×107、4.17×106、2.38×105、2.11×105、1.87×105、1.81×105、7.01×103、1.86×103，结合位点数均为1。八种黄酮小分子与BHb相互作用过程中都存在非辐射能量转移，且结合反应过程为自发进行。黄芩苷、木犀草素、木犀草苷、芹菜素、金合欢素均以疏水作用力与BHb发生相互作用，野黄芩苷、金丝桃苷以静电作用，金合欢苷以氢键和范德华力作用于BHb。同步荧光分析和三维光谱表明，八种黄酮小分子与BHb相互作用后，影响其原有光谱发生红移，自身蛋白质构象发生变化。在Fe2+和Vitamin C的影响下，八种黄酮小分子与BHb的相互作用分别有不同程度变化。　　结论：在模拟人体生理pH环境下，298K及310K温度下，八种黄酮类小分子与BHb发生了相互作用，改变了药物原来的存在状态以及在体内的分布状况，BHb原有蛋白质构象发生了变化。Fe2+和Vitamin C在反应体系中的存在，会使原结合反应产生不同程度变化。