论文部分内容阅读
目的中医有丰富的防治糖尿病及其并发症的经验。导师邱幸凡教授在多年来中医治疗糖尿病的临床基础上，提出从“脏虚络痹”这一临床辨治慢性病和老年病的基本病机认识2型糖尿病的基本病机，创立益气养阴通络方(生黄芪、玄参、生晒参、麦冬、水蛭、川贝、山药、丹参)。长期临床实践表明：益气养阴通络方具有良好的降糖效果，在防治2型糖尿病作用上疗效良好。但其作用机制不明，其科学内涵尚需通过现代科学技术加以阐述和证明。本课题旨在通过对2型糖尿病大鼠的实验研究，探讨益气养阴通络方对2型糖尿病作用的分子机制，为2型糖尿病的防治奠定理论基础并提出初步实验依据。方法1．理论研究：在整理导师邱幸凡教授多年临床经验总结基础上完成。2．实验研究：雄性SD大鼠60只，随机挑选10只作为正常组，余50只造模。正常组给予普通饲料，模型组给予高脂饲料喂养2周，一次性尾静脉注射链脲佐菌素(STZ)30 mg／kg造模。39只成模大鼠随机分为4组，加上正常组，共5组灌胃：中药Ⅰ组给予益气养阴通络方中剂量药液(10mg／kg／d)；中药Ⅱ组给予益气养阴通络方高剂量药液(20mg／kg／d)；消渴丸组(对照组)给予消渴丸混悬液(1.5g／kg／d)；正常组、病理组给予生理盐水。灌胃8周后，尾静脉采血测大鼠空腹血糖(FBG)；颈动脉采血放射免疫分析法测空腹血胰岛素(FINS)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平，以ISI公式计算胰岛素敏感指数；取骨骼肌、脂肪组织，免疫荧光法测大鼠骨骼肌葡萄糖转移因子4(GLUT4)、蛋白酪氨酸磷酸酶-1B(PTP-1B)蛋白表达以及脂肪组织GLUT4、TNFα蛋白表达，Westernblotting检测脂肪组织PTP-1B蛋白表达。结果1．从“脏虚络痹”认识2型糖尿病基本病机：肺脾肾气阴两虚为致病之本；痰瘀阻络为致病之标。“补脏通络”是2型糖尿病的基本治则：益气养阴，调补肺脾肾为本；祛瘀化痰，疏通络痹为标。2．2．1大鼠体重及一般状况病理组大鼠毛发干枯、杂乱、脱落、倦卧、活动减少，与正常组相比体重显著增加(P＜0.01)；治疗组大鼠精神好转、毛发光整、有色泽、活动增多，与病理组大鼠相比体重明显减轻(P＜0.01)；治疗纪之间大鼠体重无显著差异(P＞0.05)。2．2空腹血糖(FBG)、血胰岛素(FIRS)、胰岛素敏感指数(ISI)水平病理组和治疗组空腹血糖均明显高于正常组(P＜0.01)；治疗组空腹血糖水平显著低于病理组(P＜0.01)；各治疗组之间空腹血糖水平无显著差异(P＞0.05)。各组间血清胰岛素水平无差别(P＞0.05)。与正常组相比，病理组ISI明显下降(P＜0.05)；与病理组相比，各治疗组ISI均有提高(P＜0.05)。2．3血清TNF-α水平病理组大鼠血清TNF-α水平显著高于正常组(p＜0.01)；治疗组血清TNF-α水平明显低于病理组(P＜0.01)；中药Ⅰ组、Ⅱ组之间血清TNF-α水平无差别(p＞0.05)，且均低于对照组(p＜0.05)。2．4骨骼肌GLUT4蛋白表达水平病理组与正常组比较，骨骼肌GLUT4蛋白表达显著减少(P＜0.01)；治疗组与病理组比较，骨骼肌GLUT4蛋白表达水平显著增高(P＜0.01)；中药Ⅱ组、对照组、正常组骨骼肌GLUT4蛋白表达水平均无显著差异(P＞0.05)；中药Ⅰ组骨骼肌GLUT4蛋白表达水平低于对照组(P＜0.05)。2．5骨骼肌PTP-1B蛋白表达水平与正常组相比，病理组骨骼肌PTP-1B蛋白表达水平明显增高(P＜0.01)；治疗组与病理组比较，骨骼肌PTP-1B蛋白表达水平显著下降(P＜0.01)；中药Ⅱ组、对照组骨骼肌PTP-1B蛋白表达水平接近正常组(P＞0.05)；中药Ⅰ组骨骼肌PTP-1B蛋白表达水平高于对照组(P＜0.05)。2．6脂肪组织GLUT4蛋白表达水平病理组与正常组比较，脂肪组织GLUT4蛋白表达显著减少(P＜0.01)；治疗组与病理组比较，脂肪组织GLUT4蛋白表达水平显著增高(P＜0.01)；中药Ⅰ组、Ⅱ组脂肪组织GLUT4蛋白表达水平接近正常组(P＞0.05)，且均高于对照组(P＜0.05)。2．7脂肪组织TNFα蛋白表达水平与正常组相比，病理组脂肪组织TNFα蛋白表达水平明显增高(P＜0.01)；与病理组比较，治疗组脂肪组织TNFα蛋白表达水平明显降低(P＜0.01)；中药Ⅱ组脂肪组织TNFα蛋白表达水平接近正常组(P＞0.05)，且低于对照组(P＜0.05)。2．8脂肪组织PTP-1B蛋白表达水平病理组与正常组比较，脂肪组织PTP-1B蛋白表达水平增加明显，密度测定显示增加3.2倍(P＜0.01)；中药Ⅱ组与病理组比较，脂肪组织PTP-1B蛋白表达水平明显减少，密度测定显示减少57％(P＜0.01)，但未达到正常组水平(P＜0.01)；中药Ⅱ组脂肪组织PTP-1B蛋白表达水平高于对照组(P＜0.01)、低于中药Ⅰ组(P＜0.01)。结论本实验结果表明益气养阴通络方能显著降低2型糖尿病大鼠血糖水平，改善糖尿病大鼠糖代谢紊乱。其作用机制可能为缓解2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗。益气养阴通络方缓解2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗的机制可能是其能减轻2型糖尿病大鼠体重，降低2型糖尿病大鼠血清TNFα水平，提高2型糖尿病大鼠骨骼肌、脂肪组织的胰岛素敏感性，其深入机制可能为：增加2型糖尿病大鼠骨骼肌、脂肪组织GLUT4蛋白表达；降低2型糖尿病大鼠骨骼肌、脂肪组织PTP-1B蛋白表达；降低2型糖尿病大鼠脂肪组织TNFα蛋白表达。