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目的:探讨As2O3-壳聚糖纳米粒（arsenic trioxide loaded chitosan nanoparticles，As2O3-NPCS）对小鼠移植性肝癌的抗肿瘤作用和可能机制以及对荷瘤小鼠免疫功能的调节作用。
方法:小鼠腋窝皮下接种肝癌HEPS 细胞建立小鼠肝癌皮下移植瘤模型，随机分为10 组：生理盐水（normal saline，NS）组，As2O3-NPCS 高、中、低剂量组（34.0mg﹒kg-1﹒d-1，17.0mg﹒kg-1﹒d-1 和8.5mg﹒kg-1﹒d-1），三氧化二砷（arsenic trioxide ，As2O3）高、中、低剂量组（4.0mg﹒kg-1﹒d-1， 2.0mg﹒kg-1﹒d-1 和1.0mg﹒kg-1﹒d-1）, 壳聚糖纳米粒（chitosan nanoparticles ，NPCS）高、中、低剂量组（30.0mg﹒kg-1﹒d-1，15.0mg﹒kg-1﹒d-1 和7.5mg﹒kg-1﹒d-1），接种后72 小时开始尾静脉给药，每天给药一次，连续7 天，逐日测量小鼠瘤体积并绘制肿瘤生长曲线，末次给药后24h，分离肿瘤称重并计算抑瘤率；H.E.染色，观察肿瘤组织及重要脏器形态学改变，图像分析仪测量肿瘤坏死面积；TUNEL 法检测肿瘤细胞凋亡，计算凋亡指数；免疫组织化学染色（Power VisonTM 二步法）检测Bax、Bcl-2 和Caspase-3蛋白表达，图像分析仪测定各蛋白单位面积的灰度值（optical density，OD 值）。
采小鼠外周血，检测各组小鼠外周血CD3+、CD4+、CD8+水平；测量小鼠体重，脾脏和胸腺重量，计算脾指数、胸腺指数；分离脾脏细胞，用MTT 法检测T 淋巴细胞转化率，并用Cell counting kit-8 测定脾淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤能力。
结果:
1. 用药结束，用药组移植瘤平均瘤重量均小于NS 组（P<0.05）；其中As2O3-NPCS 高剂量组平均瘤重量最小，除了与As2O3-NPCS 中剂量组的差异无统计学意义以外（P>0.05），其平均瘤重低于其他各组（P<0.05）；As2O3-NPCS 高、中、低剂量组与相应剂量As2O3 和NPCS 各组比较平均瘤重低（P<0.05）；
As2O3-NPCS 高剂量组的平均瘤重比其低剂量组低（P<0.05），瘤重与As2O3-NPCS用量呈负相关（r=-0.467，P<0.01）。
2. 组织形态学观察可见As2O3-NPCS各剂量组肿瘤细胞坏死明显，坏死面积较大，以As2O3- NPCS高剂量组最为明显，除了与As2O3-NPCS中剂量组的差异无统计学意义以外（P>0.05），与其他组比较差异有统计学意义（P<0.05），As2O3-NPCS各剂量组肿瘤细胞坏死面积大于相应剂量的As2O3和NPCS（P<0.05），肿瘤坏死面积与As2O3-NPCS用量呈正相关（r=0.810，P<0.01）；各组小鼠心、肝、肾等脏器未见肿瘤转移；可见As2O3高剂量组和As2O3中剂量组肝脏和肾脏组织有不同程度的损害，其他组未见明显形态学改变。
3. 移植瘤细胞凋亡结果显示，除NPCS低剂量组外其它各用药组与NS组比较均有促进肿瘤细胞凋亡的作用（P<0.05）；As2O3-NPCS高、中、低剂量组的凋亡指数（apoptosis index，AI）高于相应剂量As2O3和NPCS组（P <0.05）；其中As2O3-NPCS高剂量组促进皮下移植瘤细胞凋亡作用明显强于其他各组（P<0.05）；凋亡指数与As2O3-NPCS用量呈正相关（r=0.756，P<0.01）。
4. 免疫组化染色结果显示，用药组Bax表达均高于NS组，除As2O3和NPCS低剂量组外其他用药组与NS比较差别有统计学意义（P<0.05），As2O3-NPCS高剂量组Bax蛋白表达高于其他用药组，与其他组（除外中剂量As2O3-NPCS组和高剂量As2O3组）比较差别有统计学意义（P<0.05）；As2O3-NPCS高、中、低剂量组Bax（除了As2O3高剂量组）表达高于相应剂量As2O3和NPCS组（P<0.05）；Bax表达与As2O3-NPCS用量呈正相关（r=0.635，P<0.01）。用药组（除NPCS低剂量组）Bcl-2蛋白表达低于NS组，As2O3-NPCS高剂量组Bcl-2蛋白表达各低于其他用药组（除外中剂量As2O3-NPCS组和高剂量As2O3组）；As2O3-NPCS高、中、低剂量组（除了As2O3高剂量组）Bcl-2蛋白表达低于相应剂量As2O3和NPCS组（P<0.05）；Bcl-2表达与As2O3-NPCS用量呈负相关（r=-0.825，P<0.01）。用药组Bax/Bcl-2比值均比NS组高（均为P<0.05）；As2O3-NPCS高剂量组Bax/Bcl-2比值均高于其它各组（除外中剂量As2O3-NPCS组和高剂量As2O3组）（P<0.05）；As2O3-NPCS高、中、低剂量组Bax/Bcl-2比值分别高于相应剂量As2O3和NPCS组（P<0.05）； Bax/Bcl-2比值与As2O3-NPCS用量呈正相关（r=0.844，P<0.01）。
用药组（除低剂量NPCS组）的Caspase-3蛋白表达与NS组相比均不同程度增高（P<0.05）；除中剂量As2O3-NPCS组（P>0.05）之外，As2O3-NPCS高剂量组Caspase-3蛋白表达高于的其他各组（P<0.05）；As2O3-NPCS高、中、低剂量组高于相应剂量As2O3 和NPCS组（P<0.05 ）； Caspase-3蛋白表达与As2O3-NPCS用量呈正相关（r=0.813，P<0.01）。
5. 用药结束，As2O3-NPCS各剂量组、As2O3高剂量组、As2O3中剂量组、NPCS高剂量组、NPCS中剂量组荷瘤小鼠外周静脉血CD3+，CD4+，CD4+/CD8+水平明显高于NS组，As2O3-NPCS各剂量组、As2O3高剂量组、As2O3中剂量组、NPCS高剂量组、NPCS中剂量组与NS组比较，差异有统计学意义（P<0.05），As2O3-NPCS各剂量组、As2O3高剂量组、As2O3中剂量组、NPCS高剂量组、NPCS中剂量组T淋巴细胞转化率及杀伤率，与NS组比较，差异有统计学意义（P<0.05）。As2O3-NPCS各剂量组脾指数，胸腺指数均有不同程度的增大，尤其是As2O3-NPCS高剂量组，脾指数，胸腺指数明显大于NS组（P<0.05）。
结论:
1. As2O3-NPCS与相同剂量的As2O3或NPCS相比，显示较强的抗肿瘤作用；
2. As2O3-NPCS 可能从肿瘤生长的多个环节抑制小鼠HEPS 肝癌移植瘤生长：
（1）As2O3-NPCS 可能通过上调Bax，下调Bcl-2 表达，增加Caspase-3 表达，促进移植瘤细胞凋亡而抑制移植瘤生长；
（2）As2O3-NPCS 可能通过引起移植瘤组织坏死而抑制移植瘤生长；
3. As2O3-NPCS 在一定程度上减轻As2O3 对小鼠肝脏和肾脏的毒性作用。
4. As2O3-NPCS 可以改善荷瘤小鼠的免疫状态，提高机体免疫力。
方法:小鼠腋窝皮下接种肝癌HEPS 细胞建立小鼠肝癌皮下移植瘤模型，随机分为10 组：生理盐水（normal saline，NS）组，As2O3-NPCS 高、中、低剂量组（34.0mg﹒kg-1﹒d-1，17.0mg﹒kg-1﹒d-1 和8.5mg﹒kg-1﹒d-1），三氧化二砷（arsenic trioxide ，As2O3）高、中、低剂量组（4.0mg﹒kg-1﹒d-1， 2.0mg﹒kg-1﹒d-1 和1.0mg﹒kg-1﹒d-1）, 壳聚糖纳米粒（chitosan nanoparticles ，NPCS）高、中、低剂量组（30.0mg﹒kg-1﹒d-1，15.0mg﹒kg-1﹒d-1 和7.5mg﹒kg-1﹒d-1），接种后72 小时开始尾静脉给药，每天给药一次，连续7 天，逐日测量小鼠瘤体积并绘制肿瘤生长曲线，末次给药后24h，分离肿瘤称重并计算抑瘤率；H.E.染色，观察肿瘤组织及重要脏器形态学改变，图像分析仪测量肿瘤坏死面积；TUNEL 法检测肿瘤细胞凋亡，计算凋亡指数；免疫组织化学染色（Power VisonTM 二步法）检测Bax、Bcl-2 和Caspase-3蛋白表达，图像分析仪测定各蛋白单位面积的灰度值（optical density，OD 值）。
采小鼠外周血，检测各组小鼠外周血CD3+、CD4+、CD8+水平；测量小鼠体重，脾脏和胸腺重量，计算脾指数、胸腺指数；分离脾脏细胞，用MTT 法检测T 淋巴细胞转化率，并用Cell counting kit-8 测定脾淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤能力。
结果:
1. 用药结束，用药组移植瘤平均瘤重量均小于NS 组（P<0.05）；其中As2O3-NPCS 高剂量组平均瘤重量最小，除了与As2O3-NPCS 中剂量组的差异无统计学意义以外（P>0.05），其平均瘤重低于其他各组（P<0.05）；As2O3-NPCS 高、中、低剂量组与相应剂量As2O3 和NPCS 各组比较平均瘤重低（P<0.05）；
As2O3-NPCS 高剂量组的平均瘤重比其低剂量组低（P<0.05），瘤重与As2O3-NPCS用量呈负相关（r=-0.467，P<0.01）。
2. 组织形态学观察可见As2O3-NPCS各剂量组肿瘤细胞坏死明显，坏死面积较大，以As2O3- NPCS高剂量组最为明显，除了与As2O3-NPCS中剂量组的差异无统计学意义以外（P>0.05），与其他组比较差异有统计学意义（P<0.05），As2O3-NPCS各剂量组肿瘤细胞坏死面积大于相应剂量的As2O3和NPCS（P<0.05），肿瘤坏死面积与As2O3-NPCS用量呈正相关（r=0.810，P<0.01）；各组小鼠心、肝、肾等脏器未见肿瘤转移；可见As2O3高剂量组和As2O3中剂量组肝脏和肾脏组织有不同程度的损害，其他组未见明显形态学改变。
3. 移植瘤细胞凋亡结果显示，除NPCS低剂量组外其它各用药组与NS组比较均有促进肿瘤细胞凋亡的作用（P<0.05）；As2O3-NPCS高、中、低剂量组的凋亡指数（apoptosis index，AI）高于相应剂量As2O3和NPCS组（P <0.05）；其中As2O3-NPCS高剂量组促进皮下移植瘤细胞凋亡作用明显强于其他各组（P<0.05）；凋亡指数与As2O3-NPCS用量呈正相关（r=0.756，P<0.01）。
4. 免疫组化染色结果显示，用药组Bax表达均高于NS组，除As2O3和NPCS低剂量组外其他用药组与NS比较差别有统计学意义（P<0.05），As2O3-NPCS高剂量组Bax蛋白表达高于其他用药组，与其他组（除外中剂量As2O3-NPCS组和高剂量As2O3组）比较差别有统计学意义（P<0.05）；As2O3-NPCS高、中、低剂量组Bax（除了As2O3高剂量组）表达高于相应剂量As2O3和NPCS组（P<0.05）；Bax表达与As2O3-NPCS用量呈正相关（r=0.635，P<0.01）。用药组（除NPCS低剂量组）Bcl-2蛋白表达低于NS组，As2O3-NPCS高剂量组Bcl-2蛋白表达各低于其他用药组（除外中剂量As2O3-NPCS组和高剂量As2O3组）；As2O3-NPCS高、中、低剂量组（除了As2O3高剂量组）Bcl-2蛋白表达低于相应剂量As2O3和NPCS组（P<0.05）；Bcl-2表达与As2O3-NPCS用量呈负相关（r=-0.825，P<0.01）。用药组Bax/Bcl-2比值均比NS组高（均为P<0.05）；As2O3-NPCS高剂量组Bax/Bcl-2比值均高于其它各组（除外中剂量As2O3-NPCS组和高剂量As2O3组）（P<0.05）；As2O3-NPCS高、中、低剂量组Bax/Bcl-2比值分别高于相应剂量As2O3和NPCS组（P<0.05）； Bax/Bcl-2比值与As2O3-NPCS用量呈正相关（r=0.844，P<0.01）。
用药组（除低剂量NPCS组）的Caspase-3蛋白表达与NS组相比均不同程度增高（P<0.05）；除中剂量As2O3-NPCS组（P>0.05）之外，As2O3-NPCS高剂量组Caspase-3蛋白表达高于的其他各组（P<0.05）；As2O3-NPCS高、中、低剂量组高于相应剂量As2O3 和NPCS组（P<0.05 ）； Caspase-3蛋白表达与As2O3-NPCS用量呈正相关（r=0.813，P<0.01）。
5. 用药结束，As2O3-NPCS各剂量组、As2O3高剂量组、As2O3中剂量组、NPCS高剂量组、NPCS中剂量组荷瘤小鼠外周静脉血CD3+，CD4+，CD4+/CD8+水平明显高于NS组，As2O3-NPCS各剂量组、As2O3高剂量组、As2O3中剂量组、NPCS高剂量组、NPCS中剂量组与NS组比较，差异有统计学意义（P<0.05），As2O3-NPCS各剂量组、As2O3高剂量组、As2O3中剂量组、NPCS高剂量组、NPCS中剂量组T淋巴细胞转化率及杀伤率，与NS组比较，差异有统计学意义（P<0.05）。As2O3-NPCS各剂量组脾指数，胸腺指数均有不同程度的增大，尤其是As2O3-NPCS高剂量组，脾指数，胸腺指数明显大于NS组（P<0.05）。
结论:
1. As2O3-NPCS与相同剂量的As2O3或NPCS相比，显示较强的抗肿瘤作用；
2. As2O3-NPCS 可能从肿瘤生长的多个环节抑制小鼠HEPS 肝癌移植瘤生长：
（1）As2O3-NPCS 可能通过上调Bax，下调Bcl-2 表达，增加Caspase-3 表达，促进移植瘤细胞凋亡而抑制移植瘤生长；
（2）As2O3-NPCS 可能通过引起移植瘤组织坏死而抑制移植瘤生长；
3. As2O3-NPCS 在一定程度上减轻As2O3 对小鼠肝脏和肾脏的毒性作用。
4. As2O3-NPCS 可以改善荷瘤小鼠的免疫状态，提高机体免疫力。