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多胺包括精胺、精眯和腐胺,是调节细胞生长的重要物质,它可以通过改变DNA结构和调节信号传导途径等方式调节基因的表达,从而在细胞生长和分化过程中发挥着重要的作用。有研究发现,在食管的肿瘤细胞和组织中多胺的含量和生物合成明显增高。如果能有效减弱多胺在肿瘤细胞中的过度表达,则可抑制肿瘤细胞的生长。因而研究抑制多胺合成的关键酶的方法就成了近来癌症治疗的热点。鸟氨酸脱羧酶(ODC)和S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶(AdoMetDC)是多胺生物合成的关键酶。我们在成功构建并扩增出ODC和AdoMetDC双反义RNA腺病毒载体的基础之上。研究鸟氨酸脱羧酶(ODC)和S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶(AdoMetDC)双反义RNA腺病毒对食管癌细胞增殖和侵袭的抑制作用。研究目的探讨鸟氨酸脱羧酶(ODC)和S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶(AdoMetDC)双反义腺病毒载体(Ad-ODC-AdoMetDCas)对人食管癌Eca109细胞多胺合成、细胞增殖和侵袭的抑制作用。研究方法1、构建并扩增出ODC和AdoMetDC双反义RNA腺病毒载体;2、重组腺病毒Ad-ODC-AdoMetDCas感染Eca109细胞的效率的测定:采用不同的MOI Ad-GFP感染Eca109细胞,用来检测腺病毒介导的基因转染效率;3、采用活细胞计数法实验观察Ad-ODC-AdoMetDCaS对食管癌Eca109细胞生长增殖的影响;4、应用Western印迹和高效液相色谱分析法(HPLC)分别检测双反义RNA腺病毒对食管癌Eca109细胞中ODC和AdoMetDC蛋白表达,以及胞内多胺合成的抑制作用;5、采用Matrigel侵袭实验分析腺病毒载体对Eca109细胞侵袭活性的改变;6、应用裸鼠皮下移植瘤模型观察Ad-ODC-AdoMetDCas对移植食管癌Eca109细胞增殖的抑制作用。研究结果1、成功构建并扩增出ODC和AdoMetDC双反义RNA腺病毒载体;2、当感染效率为50时,腺病毒对Eca109细胞感染率为75%,所以后续实验中的MOI确定为50;3、活细胞计数法表明,Ad-ODC-AdoMetDCas对食管癌Eca109细胞生长增殖有明显抑制作用(P＜0.01);4、Western印迹证实Ad-ODC-AdoMetDCas可明显抑制Eca109细胞中ODC和AdoMetDC蛋白的表达;高效液相色谱分析法(HPLC)结果显示,Eca109细胞感染Ad-ODC-AdoMetDCas后细胞内腐胺、精胺、精脒等三种多胺含量都明显降低(P＜0.05);5、Matrigel侵袭实验结果显示,Ad-ODC-AdoMetDCas可显著降低Eca109细胞的体外侵袭能力(P＜0.05);6、体内实验显示,Ad-ODC-AdoMetDCas双反义RNA腺病毒载体对已形成的裸鼠皮下移植瘤具有明显的抑制作用(P＜0.05或P＜0.01)。研究结论鸟氨酸脱羧酶(ODC)和S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶(AdoMetDC)双反义RNA重组腺病毒能显著抑制食管癌Eca109细胞的增殖和侵袭,具有食管癌基因治疗临床应用的潜在价值。