诃子总酚酸提取工艺及其抗腹泻活性的研究

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诃子为使君子Terminalia chebula Retz.或绒毛诃子Terminalia chebula Retz.var.tomentella Kurt.的干燥成熟果实。性苦、酸、涩,味平。具有涩肠敛肺之功效。可用于治疗猪、马、羊、牛等动物久泻久痢的症状。而目前尚无关于诃子抗腹泻实验的相关报道,因此,本研究在优化诃子总酚酸超声提取工艺的基础上,对诃子抑制蓖麻油诱导的小鼠腹泻模型的活性进行了评价,并进一步从对离子通道影响,初步探讨了诃子抗腹泻机制。采用单因素及响应面相结合的方法确定了诃子超声提取工艺,其优化后的最佳工艺条件为:乙醇浓度68%、超声强度3.6 W/cm~2,液料比23 mg/mL,粒径18 mm、超声时间20min、提取温度70℃以及提取2次。在此最佳条件下,总酚酸的提取率为448.7±2.15 mg GAE/g DW与预测值(447.8 mg GAE DW/g)相近。诃子提取物能够抑制DPPH、ABTS和超氧自由基的产生,并且具有良好的铁离子还原能力,其在一定范围内体外抗氧化活性与总酚酸的含量正相关。本文的第二部分主要研究诃子的水提物及其不同萃取部位的抗腹泻活性。通过蓖麻油诱导的大小鼠腹泻模型来评价诃子水提物的抗腹泻活性并找出诃子具有抗腹泻活性的有效部位,通过组织病理学来评价诃子对小肠及肝脏的保护作用。实验剂量为200、400和800mg/kg的诃子水提物呈现出剂量依赖性的抗腹泻作用,其中400和800 mg/kg剂量组显著延迟了初次腹泻时间,减少了稀便或半干便的频率和碳沫推进速率。诃子水提物(200,400和800 mg/mL)显著(p<0.05)并且呈现剂量依赖性的降低了蓖麻油导致的大鼠小肠积液体积。用蓖麻油处理过的小鼠的小肠和肝脏出现了显著的病理学变化,而给药组小鼠的损伤明显减弱。此外,实验证明乙酸乙酯萃取部分是诃子抗腹泻活性的有效部位,其主要组成成分是单宁酸,HPLC-ESI-MS分析其成分包括:莽草酸、没食子酸,5-O-没食子酰莽草酸、柯里拉京、3,4,8,9,10-五羟基苯并[b,d]吡喃-6-酮和鞣花酸。最后,对诃子抗蓖麻油诱导腹泻的机制进行了初步探究,将BALB/c小鼠分为4组,连续灌喂给药7天后,处死取出小鼠的空肠中段。应用RT-PCR试验测定NHE1NHE2,NHE3,CFTR,SGLT1,AQP4这6种相关离子通道表达量的变化情况。结果显示:以空白组为对照,腹泻模型组小鼠的NHE1、NHE2、CFTR、SGLTI和AQP4基因的mRNA表达量显著受抑制;以腹泻模型组为对照,给药组中的CFTR、NHE1和SGLT1基因的表达量有一定程度的升高,证明了诃子提取物在这3个离子通道中发挥了重要作用。本实验确定了诃子总酚酸的提取工艺,对诃子抗腹泻活性进行了评价,并对诃子抗腹泻机制进行了初步研究,为诃子作为抗腹泻药物在临床中的应用提供了必要的理论基础。
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