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我国研制成功的马传染性贫血驴白细胞弱毒(equine infectious anemia virus donkey leukocyteattenuated，EIAVDLA)疫苗成功控制了马传染性贫血病在我国的流行。该疫苗具有良好的安全性和有效性，成为研究包括人艾滋病病毒在内的慢病毒疫苗的良好自然动物模型。EIAV弱毒疫苗研制成功的路线是：将一株来源于马体的EIAV强毒（辽毒株、EIAVL）经过驴体连续传代100余代使病毒毒力增强后获得了驴强毒株（EIAVD，对马和驴90％致死率），然后将驴强毒株通过驴白细胞体外连续培养驯化120代，使病毒毒力丧失的同时保持了良好的免疫原性，最终培育成功了EIAV驴白细胞弱毒疫苗(EIAVDLA)。将驴白细胞弱毒疫苗进一步通过驴胎皮肤细胞继代，又获得比驴白细胞弱毒疫苗免疫保护效果更好的驴胎皮肤细胞（fetal donkey dermal cells，FDD）弱毒疫苗。前病毒DNA基因组两端是长末端重复序列（long terminal repeat，LTR），LTR含有控制病毒RNA转录的启动子和增强子。LTR是基因组变异率最高的区域。本研究对驴白细胞弱毒疫苗株(EIAVDLA)及其在驴胎皮肤细胞上传代获得的各代次驴胎皮肤细胞弱毒(第1-26代EIAVFDD)LTR进行测序分析及LTR的启动子功能比较。EIAV以准种形式存在，EIAVDLA、EIAVFDD LTR存在多种类型，一些类型占主要优势。EIAVDLA LTR按负调节区（NRE）序列不同可分为四种类型：NREⅠ型与强毒株NRE区长度相同但存在点突变现象，占EIAVDLALTR的1/3；NREⅢ型的NRE有17nt插入、10nt缺失，占EIAVDLALTR的2/3，而只插入17nt的NREⅡ型、只缺失10nt的NREⅣ型每种类型只检测到1个克隆。增强子区部分克隆有一段16nt的插入序列，其中包含1个PU.1细胞转录因子结合位点。EIAVDLA LTR转录起始位点分为GGTC、AAAC、AGAC和GAAC等四种类型，在所测序的21个克隆中所占比例分别为23.8％、47.6％、14.3％和14.3％。强毒株的转录起始位点为GGAC。启动子活性比较实验说明负调节区的插入序列对LTR的启动子活性有一定抑制作用，增强子区插入序列对LTR的启动子活性有一定增强作用，但均未达到显著性差异。转录起始位点对LTR启动子活性大小的影响顺序为：GGTC＞AAAC＞AGAC＞GGAC，但差异不显著。第13、26代EIAVFDD LTR的启动子活性在马巨噬细胞和驴胎皮肤细胞中显著高于EIAVDLA、EIAVD LTR的启动子活性，EIAVD LTR的活性最低。疫苗培育过程中不同阶段EIAV随着病毒毒力的降低，LTR的启动子活性逐渐增加。实验表明LTR是EIAV细胞嗜性及毒力的影响因素之一。EIAVDLA在驴胎皮肤细胞传代过程中LTR负调节区也发生了明显变异。第10代EIAVFDDLTR开始出现11nt的插入序列（GATGACTAGCT）；第13代插入序列发生突变（CCCTTATGA CTAGCT），但不占主要优势，在第23代含有这段插入序列的LTR序列成为绝对优势的类型；第21代EIAVFDD LTR 49nt后缺失了CTCTCA。第23代LTR序列的第24-63nt有10个A→G的突变，在第23、26代LTR序列中占主要优势。由于大量点突变的出现，使第23代LTR的第54-68nt与第70-83nt形成不完全重复。LTR的启动子活性比较实验说明：随着EIAVDLA在驴胎皮肤细胞中传代次数的增加，EIAVFDD LTR的启动子活性逐渐增强，但差异不显著（P＞0.05）。病毒感染细胞提供Tat，LTR启动子的激活活性是基础活性的1.5-2.7倍。EIAVDLA LTR启动子活性在皮肤细胞中显著低于EIAVFDD LTR，P＜0.01。用PCR方法对第19、26代EIAVFDD前病毒全基因进行分段克隆与测序。对无免疫保护性的第19、26代EIAVFDD全基因序列与四个参考毒株比较分析发现，gag只有1个氨基酸与四个参考毒株不同，但与国外毒株1369株相应位置氨基酸相同；pol复制酶发生8处氨基酸变异，有3处氨基酸变异导致疏水性改变。env基因发生了多处稳定性点突变，Env的gp90缺失了2个N-连接糖基化位点，主要中和决定区有1个氨基酸突变，但亲水性没有改变。gp45与EIAVFDD疫苗株一样有TM截短现象。S1基因编码的Tat蛋白氨基酸序列未发生变异。S2蛋白氨基酸序列无变异。S3编码的Rev发生3处突变，有两处氨基酸的突变，其中1个氨基酸突变位点位于Rev功能的基本区，基本区前还出现一段26个氨基酸缺失，这3个突变位点对Rev的功能及病毒毒力的影响有待于进一步研究。将第26代EIAVFDD弱毒接种马体后，病毒载量处于极低水平，接近检测下限，诱导的抗体反应微弱，接种后6个月内未检测到LTR序列的变异。