目的糖耐量低减(impaired glucose tolerance,IGT)是介于正常糖耐量(normal glucose tolerance, NGT)与糖尿病(diabetes mellitus, DM)之间的一种糖代谢异常状态。世界范围各区域、各性别IGT的检出率均高于DM,并且除了发展为糖尿病外,IGT人群还可出现心脑血管疾病、微血管疾病、脂代谢紊乱、代谢综合征等的表现,可见糖尿病并发症已提前到IGT阶段,因此,目前对IGT的干预工作越来越受到重视。本课题旨在通过对大鼠在胚胎发育期分别予补肾方干预,并设补气血方做参考,以研究中医补肾方在胚胎发育期干预能否对高脂饮食造成的IGT起到预防作用,以期为全世界提供预防IGT及进一步预防困扰人类的诸多重大慢性疾病的新思路,为全人类的优生优育、生活质量的提高提供简便易行的技术方法。同时,也为中医的“肾为先天之本”、“肾主生殖”、“肾主生长发育”、“补母益子”、“治未病”等理论提供实验依据,进一步为中医的科学性提供现代依据,为中医更好的走向世界打下坚实的基础。方法Wistar大鼠雌雄比例2：1合笼过夜得孕鼠,将孕鼠分为正常对照组、模型组、左归丸组、右归丸组、八珍汤组,常规饲料喂养。正常对照组和模型组分别于孕1d-19d生理盐水灌胃,各用药组分别以左归丸、右归丸、八珍汤灌胃。三周后得子鼠,在各组每窝子鼠中各取1只雄性子鼠组成新组,组别不变。重新分组后,除正常对照组外,其余各组均于6周龄开始高脂饲料喂养。1.高脂饲料喂养12周后,测各组空腹血糖(FBG)、糖负荷后2小时血糖(2hBG),模型组IGT模型达成模标准。处死各组大鼠,分别用电子天平测体重(Body Weight)、腹部脂肪含量Weight of Adipose Tissues),自动生化分析仪检测血脂谱(Blood Lipid),以观察高脂饮食对大鼠体重、腹部脂肪、血糖、血脂等一般情况的影响及胚胎期补肾方及补气血方干预对这些因素的影响。2.双抗体夹心ELISA去检测空腹血清胰岛素(FINS)、瘦素(Leptin)、指联素(APN),以观察高脂饮食对这些指标的影响,并通过比较分析胚胎期补肾方及补气血方干预是否有对抗高脂饮食引起的不良影响的作用。3.取部分新鲜肝组织及脂肪组织,用荧光定量PCR法检测肝组织中胰岛素受体mRNA(IRmRNA、瘦素受体mRNA (LRmRNA)表达及脂肪组织中脂联素mRNA (APNmRNA)表达,以观察胚胎期补肾方及补气血方干预是否有改变这些基因表达的作用,从而进一步探讨补肾方及补气血方胚胎期给药对高脂饮食引起的IGT的不同作用是否与其对这些基因表达的影响有关。4.取大鼠新鲜肝组织,切片做HE染色,光镜下观察其组织形态学变化。取大鼠新鲜胰腺组织,切片做免疫组化染色,光镜下观察β细胞中胰岛素的表达。比较各组肝组织的不同变化及胰岛素表达情况,探讨高脂饮食及补肾方、补气血方胚胎期给药对其不同作用。结果1.高脂饮食及补肾方、补气血方胚胎期干预对大鼠血糖、体重、腹部脂肪、血脂的影响空腹血糖：模型组FBG显著高于正常对照组,但是尚未达到糖尿病诊断标准,八珍汤组、左归丸组、右归丸组FBG均升高,与模型组无显著性差异。糖负荷后2小时血糖：模型组2hBG明显高于正常对照组(P<0.01),且均值>7.8mmol/L,造模成功。左归丸组与模型组相比较,2hBG明显降低(P<0.05)；八珍汤组和右归丸组与模型组相比,2hBG没有显著性差异。体重：模型组体重显著高于正常对照组(P<0.01),八珍汤组、左归丸组、右归丸组体重均值均小于模型组,但是无显著性差异。腹部脂肪含量：模型组腹部脂肪含量显著大于正常对照组(P<0.01),左归丸组、右归丸组腹部脂肪含量显著低于模型组(P<0.05)；而八珍汤组腹部脂肪含量与模型组比较无显著差异。腹部脂肪占体重的比值：模型组腹部脂肪占体重的比值明显大于正常对照组(P<0.05),左归丸组腹部脂肪占体重的比值也明显小于模型组(P<0.05)；八珍汤组与右归丸组腹部脂肪占体重的比值与模型组比较无显著性差异。血清高密度脂蛋白(HDL)：模型组的HDL较正常对照组显著降低(P<0.01),八珍汤组、左归丸组、右归丸组HDL水平均较模型组显著升高(P<0.01)。血清低密度脂蛋白(LDL)：模型组LDL较正常对照组显著升高(P<0.01),八珍汤组、左归丸组、右归丸组LDL水平与模型组无显著性差异。血清甘油三酯(TG)：模型组与正常对照组比较,TG均值升高,但是没有显著性差异；各用药组与模型组也无显著性差异。但是从均值上看,左归丸组与右归丸组较模型组TG降低,八珍汤组TG较模型组升高。血清总胆固醇(TC)：模型组TC较正常对照组显著降低(P<0.01),八珍汤组、左归丸组、右归丸组TC较模型组均显著升高(P<0.01)。2.高脂饮食及补肾方、补气血方胚胎期干预对大鼠空腹血清胰岛素、瘦素、脂联素的影响空腹血清胰岛素：模型组与正常对照组相比较,血清胰岛素显著升高(P<0.01)；八珍汤组、左归丸组、右归丸组血清胰岛素均显著低于模型组(P<0.01)。胰岛素敏感指数(ISI)：模型组ISI较正常对照组显著降低(P<0.01),八珍汤组ISI较模型组升高,有显著性差异(P<0.05),左归丸组和右归丸组ISI也较模型组升高,有显著性差异(P<0.01)。胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)：模型组HOMA-IR较正常对照组显著升高(P<0.01),八珍汤组HOMA-IR较模型组降低,有显著性差异(P<0.05),左归丸组和右归丸组HOMA-IR也较模型组显著降低(P<0.01)。瘦素：模型组血清瘦素水平较正常对照组显著升高(P<0.01)；左归丸组和右归丸组血清瘦素显著低于模型组(P<0.01)；而八珍汤组血清瘦素水平与模型组相比,无显著性差异。脂联素：模型组脂联素水平较正常对照组显著降低(P<0.01)；左归丸组脂联素水平较模型组显著升高(P<0.01)；八珍汤组和右归丸组脂联素均数较模型组有所升高,但是无显著性差异。3.高脂饮食及补肾方、补气血方胚胎期干预对大鼠肝组织IRmRNA、LRmRNA及脂肪组织中APNmRNA表达的影响IRmRNA与LRmRNA:正常对照组及各用药组与模型组相比,肝脏IRmRNA与LRmRNA表达量均无显著差异,但是从均值来看,模型组两种mRNA表达均较正常对照组降低；八珍汤组和左归丸组两种mRNA表达量均较模型组升高。APNmRNA:正常对照组及各用药组与模型组相比,脂肪组织APNmRNA表达量虽无显著差异,但是从均值来看,模型组脂肪组织脂联素mRNA表达量较正常对照组降低；左归丸组和右归丸组脂肪组织脂联素mRNA表达量均较模型组升高。4.高脂饮食及补肾方、补气血方胚胎期干预对大鼠肝组织形态及胰岛β细胞中胰岛素表达的影响肝组织形态学：正常对照组无脂肪变性；模型组肝细胞脂肪变性以弥漫性空泡为主,有些融合成大的脂滴空泡；左归丸组肝细胞偶见小空泡样脂肪变性；右归丸组与八珍汤组病理变化介于模型组与左归丸组之间；各组均未见肝纤维化。胰岛β细胞中胰岛素的表达：正常对照组的胰岛多形态规则,呈圆形或长椭圆形；胰岛素染色阳性的β细胞位于胰岛中央,排列规则,大小均匀,多呈圆形,胞质较多,胞浆中充满粗大的胰岛素棕黄色颗粒,颜色较深。模型组胰岛形态大小不一,多数较正常对照组明显肥大,外形不规则,充满肥大的β细胞。左归丸组的胰岛形状基本规则,没有明显增生肥大,β细胞排列较模型组规则,接近正常对照组。右归丸组与八珍汤组相似,其病理变化介于模型组与左归丸组之间。结论1.本实验中,高脂饮食会引起大鼠IGT,并伴有血脂异常、胰岛素抵抗、瘦素抵抗、脂联素减少,肝脏胰岛素受体mRNA表达、瘦素受体mRNA表达及脂肪组织脂联素mRNA表达均有下降趋势,肝组织脂肪样变性,胰岛代偿性增生肥大,胰腺β细胞也较肥大。2.大鼠胚胎期予补肾阴方左归丸干预可能通过对抗上述指标的异常改变有预防高脂饮食引发IGT的作用；并且其预防作用很可能是通过对与IGT发病有关的基因表达的影响来实现的。胚胎期予补肾阳方右归丸和补气血方八珍汤亦有一定的对抗上述某些指标改变的作用,但其作用不及左归丸,未能预防高脂饮食引起的IGT的发生。3.胚胎期予补肾阴方左归丸干预对高脂饮食引发IGT的预防作用,反映了IGT或糖尿病以“阴虚为本”的本质；也从现代医学角度为中医“肾为先天之本”、“肾主生殖发育”、“补母益子”等理论提供了实验依据；同时也体现了中医“治未病”理论中的“未病先防”的积极思想。4.从中医角度,为IGT的预防提供了新思路。