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目的:探讨创伤弧菌脓毒症大鼠肺组织内毒素受体CD14、NF-kB和IL-18的基因表达以及头孢哌酮钠和乳酸左旋氧氟沙星联合抗炎治疗对其的干预效应。
方法:
1.清洁级雄性SD大鼠110只,随机分为11组,每组10只。第1组:正常对照组(NC组);第2~6组:创伤弧菌脓毒症组(VV组),予双下肢皮下注射创伤弧菌(浓度为9×108cfu/ml,剂量为1ml/100g),制作创伤弧菌脓毒症模型,并分别于注射创伤弧菌后2h、6h、9h、12h、16h时活杀;第7~11组:创伤弧菌脓毒症联合抗炎治疗干预组(AA组),予双下肢皮下注射创伤弧菌(浓度、剂量同VV组),从注射创伤弧菌后6h起,予腹腔注射(ip)头孢哌酮钠(180mg/kg)和乳酸左氧氟沙星(18mg/kg),每日2次,分别在注射创伤弧菌后9h、12h、16h、36h、2w时活杀。无菌取部分肺组织保存于液氮中待用。
2.采用Trizol试剂提取各组大鼠肺组织总RNA,紫外分光光度计测定RNA浓度,以总RNA为模板,逆转录成cDNA;然后以cDNA为模板,以大鼠CD14、NF-kB、IL-18引物进行PCR扩增反应;扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳,电泳结果用凝胶成像系统成像,QuanityOne分析软件进行分析,以(目的基因/β-actin)为该基因表达的相对值。
3.计量资料采用均数±标准差(x±s)表示,应用SPSS10.0进行t检验、方差分析等处理。P<0.05为差异有显著性意义。
结果:
1.正常大鼠肺组织CD14mRNA表达量低。VV组各组大鼠肺组织CD14mRNA表达量均明显高于NC组(P<0.05),以6h表达量最高。从组大鼠染菌后9h、12h、16h、36h肺组织CD14mRNA表达量仍明显高于NC组(P<0.05),但呈逐渐降低趋势,至2w时与NC组相比均无明显差异(P>0.05);与相应时间点的VV组相比,AA组大鼠染菌9h、12h、16h的肺组织CD14mRNA表达量均明显降低(P<0.05)。
2.正常大鼠肺组织NF-kBmRNA表达量低。VV组各组大鼠肺组织NF-kBmRNA表达量均明显高于NC组(P<0.05),以6h表达量最高。AA组大鼠染菌后9h、12h、16h肺组织NF-kBmRNA表达量仍显著高于NC组(P<0.05),呈降低趋势,至36h、2w时与NC组相比无显著差异(P>0.05);与相应时间点的VV组相比,AA组大鼠染菌9h、12h、16h的肺组织NF-kBmRNA表达量明显降低(P<0.05)。
3.正常大鼠肺组织IL-18mRNA表达量较低。VV组各组大鼠肺组织IL-18mRNA表达量均明显高于NC组(P<0.05),以6h、9h为最高。AA组大鼠染菌后9h、12h、16h、36h肺组织IL-18mRNA表达量仍明显高于NC组(P<0.05),但呈逐渐降低趋势,至2w时与NC组比较无显著性差异(P>0.05);与相应时间点的VV组相比,AA组大鼠染菌9h、12h、16h肺组织IL-18mRNA表达量均明显降低(P<0.05)。
结论:
1.创伤弧菌脓毒症大鼠肺组织CD14、NF-kBmRNA表达量在脓毒症早期即明显增高,并持续维持在高水平;而IL-18mRNA表达上调略晚出现。
2.及早使用头孢哌酮钠和乳酸左氧氟沙星可明显减低创伤弧菌脓毒症大鼠肺组织CD14、NF-kB、IL-18mRNA的表达水平,从而有利于抑制炎症反应,有效改善创伤弧菌脓毒症的感染症状,有明显的治疗作用。