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目的:采用神经干细胞(Neuralstemcells,NSCs)移植与电刺激小脑顶核(Fastigialnucleusstimulation,FNS)相结合,探讨整体干预对移植NSCs存活、迁移与分化的作用。
方法:体外分离、培养新生大鼠海马EGF反应性NSCs,Brdu标记,并用胎牛血清诱导,观察其多向分化潜能;将实验动物分为A组:FNS+MCAo+NSCs;B组:FNS+MCAo+PBS;C组:MCAo+NSCs;D组:MCAo+PBS。A组与B组在MCAo前24h进行小脑项核刺激,四组实验动物在MCAo后24h将NSCs或PBS注入梗死同侧侧脑室内,记录梗死后6h、24h、3d、7d、14d、28d大鼠的神经功能,进行统计学分析;分别在移植后3d、7d、14d、28d处死大鼠,以梗死灶为中心切片,Brdu免疫组化染色,观察移植NSC的存活与迁移;A组与C组在移植28天先行Brdu免疫组化染色,镜下确定Brdu阳性细胞后,其临片行Brdu/NSE免疫荧光双标染色,观察移植细胞的分化。
结果:分离培养的EGF反应性细胞表达nestin抗原,并有自我更新及多向分化潜能。经Brdu标记后,90﹪以上NSCs表达Brdu抗原。移植28天内A组功能评分与其它三组有显著差异,C组与D组在移植28天内功能评分未见显著性差异。A组在移植7d、14d、28d存活细胞数显著多于C组。A组Brdu/NSE双标阳性细胞所占总体存活细胞比率显著多于C组。
结论:体外培养的大鼠海马EGF反应性NSCs在胎牛血清诱导下可分化为神经胶质细胞和神经元;单纯侧脑室移植NSCs在体内存活率低,对MCAo大鼠的功能恢复无明显作用;FNS可显著提高移植NSCs的存活率、向神经元的分化率及MCAo大鼠的神经功能评分;优化的整体环境可提高移植NSCs对局灶性脑缺血损伤细胞的替代作用。