丹参注射液对自体脂肪移植存活率影响的实验与临床研究

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先天性和后天性的组织缺损的修复是整形外科的难点和重点。缺损的组织类型各种各样,但是其中重要的组成部分是皮下脂肪。整复外科通常应用各种组织的移植、充填方法,来修复软组织缺损患者的畸形缺损。临床上常用的充填软组织的材料有自体组织和人工合成材料两种。由于合成人工材料有组织相容性差,轮廓感明显、非永久性植入等缺陷,而限制了其更广泛的应用。脂肪组织是一种常用的自体软组织修复材料。其游离组织移植亦是整形外科最常用的组织修复方法之一。它具有来源丰富,取材容易,疤痕隐蔽,操作简单,组织相容性好而无异物排斥反应等优点,然而,自体脂肪移植其较高且难以预测的吸收率是其固有的缺点,虽然一系列涉及脂肪移植、提高脂肪成活率的新技术和方法获得较为广泛的认可。但是脂肪移植存活率仍不尽如人意且治疗效果不可确定仍存在。极大地限制了其在临床上的广泛应用。脂肪细胞自身耗能高而对缺血、缺氧耐受力较差,游离移植后其需迅速从受区获得足够的营养供应。在移植物与宿主建立充分的血供之前,脂肪组织只能靠周围组织液的浸润和渗透来维持营养供应,而这种供应的距离是极为有限的。超过该距离就需要生成新的血管来提供营养,然而自发的血管生成速度每天只生长十几微米,一般要在移植后5天逐渐长入,并且新生血管只能侵入移植物的周边部位,这时中央部分的脂肪组织已经发生了细胞坏死、脂肪液化。由此可见,、尽早建立充分血供,以促进游离移植脂肪组织的再血管化是问题的关键。为加快移植体内血供的重建,从而增加移植体血供,缩短脂肪细胞缺血周期,学者们做了许多深入研究。其中较有代表性的研究方法大致包括:ASC, SVF, BRAVA的应用等等。虽然他们获得了令人鼓舞的效果,但存在的体外培养,操作繁琐,易污染,消耗大量可充填脂肪组织,患者依从性差等局限性。同时即使应用了这些辅助手段,大容量脂肪移植的成活率仍不足以令人满意。本研究通过动物实验和临床研究,观察在使用丹参注射液的情况下,自体游离脂肪移植的大体和组织学等方面的变化,游离移植脂肪中毛细血管数量和密度的变化趋势,从而评估中药制剂对脂肪颗粒移植物成活率的影响,为临床通过利用该技术手段,提高自体脂肪移植成活率提供实验及临床研究依据。探讨提高移植脂肪成活率的新途径。目的:1.探讨丹参注射液对自体脂肪移植存活率的影响2.筛选提高自体脂肪移植存活率的中药制剂3.研究丹参注射液在自体脂肪移植隆乳中应用的有效性方法1.以大白兔自体脂肪游离移植动物为模型,分为实验组和对照组,分别予以腹腔注射丹参、黄芪注射液,通过以下方法探讨对自体游离移植脂肪的作用。(1) Elisa法,在不同时间点测定血清VEGF表达水平(2)术后第2、4、12周取材,精密天平测量移植体残余质量,计算脂肪移植存活南(3)H&E染色,光镜下观察组织细胞形态,并作半定量分析。(4)免疫组化染色内皮细胞因子CD3l观察毛细血管生长情况。(5)周脂素免疫组化染色观察移植脂肪细胞活性。2.自体脂肪移植隆乳术中分实验组和对照组,实验组应用丹参注射液每天一次,共4周。随访3个月,通过以下方法探讨丹参注射液在自体脂肪移植隆乳中应用的有效性。(1)三维扫描(Konica Minota, Vivid 910)测量脂肪移植术前后体积,并计算乳房体积增大率、脂肪存活率和乳房体积增加率。(2) Hochest33342和周脂素免疫荧光染色观察移植脂肪细胞活性。(3)vWF免疫荧光染色观察移植脂肪中血管分布情况。(4) BZ-X Analyzer软件抽提vWF免疫荧光染色血管计数,计算每高倍镜视野下微血管密度。结果1.动物模型研究:(1)自体脂肪移植术后第12周,对照组与各实验组在移植脂肪重量上的差别均具有统计学意义;(2) ELISA结果表明中药各组在各时间点的血清VEGF表达水平均明显高于对照组;(3)H&E染色示中药组在脂肪细胞数量、形态均一性等方面均明显优于对照组;(4)内皮细胞CD31免疫组化染色示实验组的新生毛细血管多于对照组。实验组间比较,以黄芪组血管数量较多。(5)周脂素免疫组化染色显示实验组的移植脂肪细胞活性高于对照组。中药两实验组比较,又以丹参组较多于黄芪组和丹参黄芪组。2.自体脂肪移植隆乳的临床研究:(1)乳房体积增大量、移植脂肪存活率和乳房体积增加率等方面,丹参组高于对照组。(2) Hochest33342和周脂素免疫荧光染色观察移植脂肪细胞形态和饱满程度,丹参组高于对照组。(3)vWF免疫荧光染色的微血管分布表明实验组高于对照组。(4) BZ-X Analyzer软件抽提的vWF免疫荧光染色微血管计数和密度,均是实验组高于对照组。结论l丹参注射液能增加自体脂肪移植中微血管的数量和密度。2.丹参注射液能提高自体脂肪移植的成活率。
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