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马尾松毛虫是全球性的森林害虫,常爆发成灾,给林木资源造成了极大的损失,白僵菌生物制剂有对环境友好、不易使害虫产生抗药性等优点,在防治林业松毛虫方面发挥了优良效果。本文利用采集到的僵虫及土壤样品,分离、纯化得到24个白僵菌菌株,通过生物测定的方法获得5个高毒力菌株,并研究了其毒力稳定性和生物学特性,为有效利用白僵菌防治松毛虫的发生与危害提供参考和依据。同时为研制专用菌株的可分散油剂提供高效菌株。 本研究主要内容包括:⑴在湖北、吉林、辽宁、湖南、福建等省采集到僵虫及土壤样品,以组织分离法从僵虫中分离得到16个菌株,以土壤稀释平板法从土壤中分离得到4个菌株,当阳白僵菌厂提供4个菌株。根据24个菌株分生孢子的形态及大小,分生孢子梗、产孢细胞和产孢轴的形态,菌丝生长特征,菌落的颜色和形态,参照Macloed和李增智的分类方法,将24个菌株鉴定为球孢白僵菌(Beauveria bassiana)。将rDNA-ITS序列测序结果与NCBI中的序列进行同源性比较,20个菌株与B. bassiana相似性最高,进而采用Neighbor-joining法构建ITS系统发育树,发现20个菌株与B. bassiana9016(AY334539.1)、B. bassiana9023(AY334541.1)的遗传距离最近。⑵设置球孢白僵菌孢子悬浮液浓度为107个/ml,对马尾松毛虫越冬代幼虫进行接种,处理九天后,根据校正死亡率计算致死中时(LT50),比较毒力差异。其中B-1、B-2、B-13、B-14和B-19号菌株的LT50均小于9d,致死速度相对较快,其中B-2号菌株致死速度最快,LT50仅7.631d。通过继代培养,收集第三代(F3代)菌株的孢子,在107个/ml的孢子浓度下,测定了子代菌株对越冬代马尾松毛虫幼虫的毒力,结果表明菌株子代毒力与母代相比差异不大,说明菌株毒力较为稳定。⑶对B-1、B-2、B-13、B-14、B-19号菌株进行生物学特性研究。结果表明,5个菌株有较宽的温度适应范围,最适生长、产孢及孢子萌发的温度为26℃;在不同碳氮源利用方面,最适生长、产孢及孢子萌发的碳源为葡萄糖,最适生长及产孢的氮源为牛肉膏,最适孢子萌发的氮源为酵母浸出液。