四君子汤抗放射性肠损伤作用及其主要化学成分的研究

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放射性肠损伤常发生在核泄漏、核爆炸、核恐怖以及临床肿瘤病人的放疗过程中。电离辐射作用于机体后,通过物理、化学及生物学的复杂机理,破坏蛋白质、DNA等大分子物质,进而造成细胞、组织、器官以至于整个机体形态、功能的损伤,引起受照射者急性或慢性辐射损伤甚至癌变。体内代谢更新越快的组织对射线越为敏感,如造血组织、肠道组织。盆腹腔或腹膜恶性肿瘤的病人在接受一定剂量的放射治疗时,肠隐窝内的干细胞以及肠绒毛结构也会遭到一定程度的破坏,继而导致肠粘膜结构的破坏,使得肠道的物理屏障和免疫屏障功能都不再完整,肠腔内大量的致病生物及毒性物质进入到血液和体液循环中,引起全身性病变,严重的还会导致全身炎症反应、多器官功能不全综合征、多器官功能衰竭,最后甚至导致患者死亡。因此,探索促进放射性肠损伤修复的有效药物及方法具有重要的研究意义,并且已成为当前急需解决的重要课题。近年来,植物类药物因其易获得、副作用小倍受关注,成为具有挖掘潜力的资源。四君子汤源自宋代《太平惠民和剂局方》,由人参、白术、茯苓、甘草组成,具有益气健脾之功效,是治疗胃肠道疾病的经典和基础方剂。近年来四君子汤在对肿瘤的放化疗增效减毒方面应用广泛,尤其是在肿瘤晚期、正气亏虚之时,是扶正祛邪的常用良方。本课题主要研究四君子汤提取物对动物放射性肠损伤的治疗作用,并对四君子汤的主要化学成分进行研究。本课题对四君子汤的研究主要分为以下几个方面:1、将40只BALB/c小鼠分成4组,分别采用10Gy、11.5Gy、13Gy、14.5Gy剂量的60Coy射线进行腹部局部照射,各组小鼠30天内的存活率分别为90%、70%、30%、10%。根据结果选择13Gy作为后续实验的造模剂量。2、将50只BALB/c小鼠分成5组,每组10只,采用13Gy γ射线腹部局部照射,给药组按照0.2g/kg.0.4g/kg、0.6g/kg、0.8g/kg的剂量灌胃四君子汤提取物,对照组给予等体积的水,连续给药14天,记录30天内各组小鼠的存活情况及体重变化。结果发现四君子汤给药组的存活率高于对照组,对小鼠的生存状态及体重减轻均有一定的改善,其中0.4g/kg剂量组的存活率最高,故选择0.4g/kg作为最适给药剂量。3、将70只BALB/c小鼠分成3组,正常对照组10只,照射对照组和给药组各30只。照射对照组和给药组采用8Gyγ射线腹部局部照射,给药组按照0.4g/kg的剂量灌胃四君子汤,照射对照组给予等体积的水,连续给药14天,于照射后1、4、7、11、15、30天各组分别取5只小鼠,检测外周血象、胸腺和脾脏指数及小肠吸收功能等指标。正常对照组10只小鼠,于照射前采用相同方法取材检测。结果显示,与照射对照组相比,给药组的胸腺和脾脏指数及小肠吸收功能下降缓慢、且恢复更早,外周血象没有显著性差异。4、采用OGy.2Gy、4Gy、8Gy.16Gy剂量的60Coy射线照射大鼠小肠上皮IEC-6细胞,采用CCK-8法检测四君子汤及单味药提取物对不同剂量照射后IEC-6细胞的促增殖作用。结果发现四君子汤及单味药提取物对不同剂量照射后的IEC-6细胞均表现出一定的促增殖作用,且照射剂量越高药物的促增殖效果越明显。5、将NF-KB信号通路作为体外分子机制研究模型,采用双荧光素酶检测法考察四君子汤及单味药提取物对NF-KB信号通路的影响。结果发现四君子汤表现出轻微的激活作用,单味药中人参表现出显著的激活作用,白术和甘草有轻微的激活作用,茯苓表现出抑制作用。6、将四君子汤提取物采用正丁醇萃取的方式分成脂溶性和水溶性两个部分,采用UPLC-Q-TOF-MS/MS对四君子汤和单味药的脂溶性部分进行分析,结果四君子汤样品中共鉴定出58个化学成分,其中21个来源于人参、35个来源于甘草、2个来源于白术,结构类型主要为人参皂苷、甘草黄酮、甘草皂苷。7、对四君子汤水溶性部分采用60%乙醇沉淀,分成上清(寡聚物部分)和沉淀(多聚物部分)。采用苯酚-硫酸法和间羟基联苯法联合校正的方法对水溶性部分进行糖含量的测定,并对分子量分布进行了分析。结果发现寡聚物部分的糖含量为80.67%,分子量主要在2500以下;多聚物部分的糖含量为38.59%,分子量主要在1万以上。
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