【摘 要】
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目的:HDAC9（Histone deacetylase 9）基因与多种人类癌症密切相关,但其在胃癌中的生物学作用尚未完全揭露。本研究旨在探讨HDAC9在胃癌的表达情况及其是否通过调控上皮间质转化（Epithelial-mesenchymal transition,EMT）进程影响胃癌细胞增殖、迁移和侵袭。方法:1、采用qRT-PCR技术测定32例胃癌患者癌组织和癌旁组织的HDAC9mRNA表达水
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目的:HDAC9（Histone deacetylase 9）基因与多种人类癌症密切相关,但其在胃癌中的生物学作用尚未完全揭露。本研究旨在探讨HDAC9在胃癌的表达情况及其是否通过调控上皮间质转化（Epithelial-mesenchymal transition,EMT）进程影响胃癌细胞增殖、迁移和侵袭。方法:1、采用qRT-PCR技术测定32例胃癌患者癌组织和癌旁组织的HDAC9mRNA表达水平,并分析相关的临床病理特征。2、采用qRT-PCR和免疫印迹（Western blot）方法检测正常胃粘膜上皮细胞株（GES-1）和四种胃癌细胞株（SGC-7901、HGC-27、MKN-45、和BGC-823）HDAC9 mRNA和蛋白的表达水平。3、利用Lipofectamine 3000介导HDAC9 si-RNA转染HGC-27和BGC-823细胞株,下调细胞株HDAC9基因的表达,转染过程中可分为未转染si-RNA链的blank组,转染si-RNA NC链的si-NC组,转染si-RNA HDAC9-homo-830链的si-HDAC9-1组和转染si-RNA HDAC9-homo-1656链的si-HDAC9-2组,利用qRT-PCR和western blot方法测定HDAC9基因的下调效率,筛选有效的小干扰链并成功构建HDAC9表达下调的胃癌细胞模型。4、利用细胞功能实验（包括CCK-8、细胞克隆形成、细胞划痕和Transwell实验等）研究下调HDAC9基因表达后对HGC-27细胞增殖、迁移和侵袭的影响。5、利用细胞免疫荧光双染技术,探索E-cadherin和vimentin表达量变化,验证转染前后HGC-27细胞中EMT表型是否发生转变;采用western blot技术检测转染前后HGC-27细胞EMT标记蛋白（包括E-cadherin、N-cadherin和vimentin蛋白）和β-catenin蛋白的表达差异,验证HDAC9基因对胃癌EMT过程的调控作用。结果:1、HDAC9在胃癌组织样本中的表达量显著高于癌旁组织（P<0.001）,其表达与患者肿瘤分期和淋巴结转移相关（P均<0.05）,与性别、年龄和肿瘤大小无关（P均>0.05）,并在GEPIA数据库中证实HDAC9表达与胃癌患者肿瘤分期明显相关（P<0.01）。2、在HGC-27、MKN-45、SGC-7901和BGC-823细胞株中HDAC9mRNA和蛋白的表达量均高于GES-1细胞株,其中HDAC9 mRNA和蛋白的表达量在HGC-27细胞株中表达量最高。3、qRT-PCR结果显示在HGC-27和BGC-823细胞株中si-HDAC9-1组中的干扰效率大于50%,si-HDAC9-2组中的干扰效率小于50%,筛选出有效小干扰链si-HDAC9-1;免疫印迹技术显示在HGC-27细胞株中的si-HDAC9-1干扰效率明显高于BGC-823细胞株,成功构建HDAC9表达下调的胃癌细胞HGC-27模型。4、细胞功能实验显示si-HDAC9-1组的细胞增殖活力、形成的细胞克隆数量、细胞划痕伤口相对愈合率、细胞相对迁移率及细胞相对侵袭率均低于si-NC组。5、细胞免疫荧光双染结果显示HGC-27在单细胞水平同时表达E-cadherin荧光和vimentin荧光;western blot结果显示si-HDAC9-1组的E-cadherin蛋白表达显著高于si-NC组（P<0.001）,si-HDAC9-1组的N-cadherin、vimentin和β-catenin蛋白表达明显低于si-NC组（P均<0.01）。结论:1、HDAC9在胃癌组织和细胞株中显著高表达,与患者肿瘤分期和淋巴结转移相关。2、下调HDAC9基因的表达可抑制HGC-27细胞增殖、迁移和侵袭能力。3、HGC-27在单细胞水平共表达E-cadherin和vimentin,属于E/M杂交表型。4、下调HDAC9基因的表达可能通过Wnt/β-catenin通路抑制HGC-27细胞EMT进程。
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