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人体中的乙醇脱氢酶（alcohol dehydrogenase,ADH）及乙醛脱氢酶（aldehyde dehydrogenase,ALDH）在乙醇代谢过程中发挥着重要的作用。若ADH及ALDH在人体内均充分具备,则能较快得分解乙醇,减少究竟对中枢神经的影响,因而即使摄入一定量的乙醇,其所含有的乙醇也能在很短时间内得到充分的代谢。在人体中,ADH在一般情况下是可充分表达,且表达量基本持平的。人群内缺乏ALDH的个体则较多,而ALDH的缺乏将导致乙醇不能被完全分解为水和二氧化碳,而是以乙醛的形式继续留存于体内,使人在酒后产生恶心欲吐、昏迷不适等中枢神经麻痹状态,即醉酒症状。其中的ALDH-2就是众所周知的有高度遗传多态性并与亚洲人群的饮酒行为密切相关的基因。近年来,随着人们对获得全新的、更有效的解酒保肝药物的需求日益迫切,关于ALDH的研究工作更显其深远意义。 本文采用PCR技术,克隆获得了人aldh2基因,构建质粒pUCm-aldh2并对其测序,发现其与预期序列完全一致。再以质粒pUCm-aldh2为模板进行PCR,并将这段含酶切位点的aldh2基因重组到原核表达载体pET22b（+）中,进行IPTG诱导表达,确认人ALDH-2蛋白已实现了高水平表达,最佳表达条件为37℃、1mmol/L IPTG浓度、诱导表达6h,表达量约占总蛋白的30%。二次洗涤包涵体,可以获得纯度较高的目的蛋白,这为工业化生产提供了条件。由于重组人ALDH-2融合了6×His标签,使用Ni2+亲和层析纯化,可以获得超高纯度的目的蛋白,亲和层析结果表明,当咪唑浓度达到40mmol/L左右时,开始有目的蛋白洗出,直至咪唑浓度到达100mmol/L时结束。纯化后的目的蛋白经含有精氨酸的变性溶液稀释复性后,进行活性检测表明,该复性蛋白具有ALDH活性,比活力约为331.7U/mg。