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一、研究背景年龄相关性白内障（Age-related cataract，ARC）为全球首位致盲性眼病，随着全球人口老龄化明显加剧，其发病率将不断增加。明确ARC的发生机理对于ARC的防治具有重要意义。ARC的确切发病原因和发病机制尚不完全清楚，目前认为该病是由多种遗传和环境因素共同导致的复杂性状多基因病。最新研究发现生促红素人肝细胞受体酪氨酸激酶A2（Eph-receptor tyrosinekinase-type A2，EphA2）基因是与ARC发生相关的一个重要基因。国外研究证实高加索人群EphA2基因多态性与皮质性ARC相关，但EphA2基因突变导致ARC的机制尚不清楚。有关中国汉族人群中ARC与EphA2基因多态性的研究尚无报道。晶状体上皮细胞凋亡异常是除先天性白内障外各种白内障的重要的致病机制。EphA2受体广泛表达于上皮来源的细胞，其介导的信号传导，如活化MAPK途径，导致ERK活化，参与调控细胞增殖、细胞间粘附、细胞迁移和细胞凋亡等多种功能。衰老是ARC最为重要的一个危险因素，我们推测EphA2基因变异可能是通过影响EphA2的表达或磷酸化水平，影响MAPK/ERK通路的信号传导，促进晶状体上皮细胞的凋亡，从而导致ARC的发生，而老化则强化了这个致病过程，加速了ARC的发生。二、研究目的分析中国汉族人群中EphA2基因多态性与皮质性ARC易感性的关系；探讨EphA2多态性及老化对晶状体上皮细胞凋亡的影响以及MAPK/ERK信号通路在ARC发生发展中的作用，阐明ARC发生的分子机制。三、研究内容1.采用大样本病例对照研究方法，选取EphA2基因的五个位点（rs3768293、rs3754334、rs477558、rs707455和rs7548209），用PCR-RFLP方法进行EphA2基因分型，比较等位基因频率及基因型频率分布在皮质性ARC患者和健康对照组之间是否存在差异，明确EphA2基因多态性与ARC易感性的关系，找出疾病相关的SNPs。2.收集ARC患者晶状体前囊膜上皮组织，以角膜移植术中的透明晶状体前囊膜上皮组织作为健康对照，用荧光定量PCR法检测EphA2及ERK1/2的mRNA表达变化，Western-Blot方法检测EphA2、p-EphA2、ERK1/2、p-ERK1/2的蛋白表达。探讨EphA2与ERK1/2在ARC患者晶状体前囊膜上皮组织中的表达及意义。3.检测ARC患者晶状体前囊膜上皮组织caspase-3，caspase-9和bcl-2的mRNA表达变化及caspase-3，active caspase-3的蛋白表达，探讨凋亡相关基因在ARC发生发展中的作用。四、研究结果1.对422例皮质性ARC患者及317例健康对照EphA2基因5个多态位点进行分型，发现EphA2基因rs477558和rs7548209位点的基因型和等位基因频率在ARC患者和健康对照组之间有显著的差异。ARC患者rs477558AA基因型、rs7548209GG基因型及rs7548209G等位基因的频率均显著高于健康对照组（Pc <0.05）；ARC患者rs477558AG基因型、rs7548209CG基因型及rs7548209C等位基因的频率均显著低于健康对照组（Pc <0.05）；而EphA2基因的rs3768293，rs3754334和rs707455位点等位基因和基因型频率分布，在ARC患者和健康对照组之间均无显著差异（Pc>0.05）。另外对年龄进行的分层分析发现，年龄≥75岁组ARC患者rs7548209位点的GG基因型和G等位基因频率显著高于健康对照组（Pc <0.05）。2. ARC患者晶状体前囊膜上皮组织中EphA2、ERK1/2的mRNA及蛋白表达水平和p-EphA2、p-ERK1/2的蛋白表达水平均明显降低（P<0.01）。不同年龄、同种基因型组ARC患者之间比较，年龄≥75岁组EphA2、ERK1/2的mRNA及蛋白表达水平和p-EphA2、p-ERK1/2的蛋白表达水平明显低于年龄<75岁组（P <0.05）。相同年龄，不同基因型组（EphA2GG、EphA2CG和EphA2CC）ARC患者之间，EphA2、ERK1/2的mRNA及蛋白表达水平和p-EphA2、p-ERK1/2的蛋白表达水平均没有显著差异（P>0.05）。3. ARC患者晶状体前囊膜上皮组织中caspase-3，caspase-9的mRNA水平及caspase-3、active caspase-3的蛋白表达水平均明显升高（P <0.01）。不同年龄、同种基因型组ARC患者之间比较，年龄≥75岁组caspase-3、caspase-9的mRNA水平及caspase-3，active caspase-3的蛋白表达水平明显高于年龄<75岁组（P <0.05）。相同年龄组，不同基因型组(EphA2GG、EphA2CG和EphA2CC)ARC患者之间，其caspase-3，caspase-9的mRNA水平及caspase-3，active caspase-3的蛋白表达水平均没有显著差异（P>0.05）。与健康对照组比较，各组ARC患者晶状体前囊膜上皮组织bcl-2的mRNA水平均明显降低（P <0.01）。不同年龄、同种基因型组ARC患者之间比较，年龄≥75岁组bcl-2的mRNA水平明显低于年龄<75岁组（P <0.05）。相同年龄，不同基因型组（EphA2GG、EphA2CG和EphA2CC）ARC患者之间，bcl-2的mRNA水平均没有显著差异（P>0.05）。五、结论1. EphA2基因多态性与中国汉族皮质性ARC的遗传易感性相关；且经年龄分层分析发现rs7548209的GG基因型和G等位基因的频率分布随年龄增长而增加。2.年龄增长（或老化）可显著影响与白内障发生有关的晶状体上皮细胞的凋亡，其机理可能与EphA2表达与活性降低，抑制了ERK1/2信号通路，导致细胞凋亡有关。3. EphA2rs7548209位点的多态性不改变晶状体上皮细胞EphA2的水平，也不影响细胞凋亡，提示rs7548209多态性可能仅是疾病的标记而非疾病的致病原因（致病性SNP）。4. EphA2rs7548209多态性使ARC发生率增加的原因可能是年龄增长（或老化）使晶状体上皮细胞凋亡增加与rs7548209多态性引起ARC的其他未知因素共同作用的结果。