【摘 要】
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磷脂酰丝氨酸（PS）是细胞膜的主要成分之一,在人体的神经系统中,它通过改变神经细胞膜的流动性和通透性来调节大脑的记忆功能和情绪的稳定。大量的研究表明磷脂酰丝氨酸在抗炎,抗抑郁,提升脑认知功能方面有很好的疗效。初代的磷脂酰丝氨酸产品原料主要来源于牛脑,其安全性不能得到保证,因此限制了磷脂酰丝氨酸的应用。随着技术的进步,从大豆中提取分离的磷脂酰丝氨酸具备更安全的特性,磷脂酰丝氨酸已被世界各国纳入到功能
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磷脂酰丝氨酸（PS）是细胞膜的主要成分之一,在人体的神经系统中,它通过改变神经细胞膜的流动性和通透性来调节大脑的记忆功能和情绪的稳定。大量的研究表明磷脂酰丝氨酸在抗炎,抗抑郁,提升脑认知功能方面有很好的疗效。初代的磷脂酰丝氨酸产品原料主要来源于牛脑,其安全性不能得到保证,因此限制了磷脂酰丝氨酸的应用。随着技术的进步,从大豆中提取分离的磷脂酰丝氨酸具备更安全的特性,磷脂酰丝氨酸已被世界各国纳入到功能性食品行列,在我们国家,磷脂酰丝氨酸已纳入到新食品原料名单中。市场上磷脂酰丝氨酸的终端产品主要是胶囊,粉剂和片剂等。胶囊的体积大,会造成老人和小孩吞咽困难的问题;粉剂因为其水溶性较差,生物利用度不高限制了他的应用。因此制备一款高稳定性高生物利用度的磷脂酰丝氨酸乳剂将能更好的推动磷脂酰丝氨酸产业的发展。本研究通过响应面的方法筛选出最优的乳剂配方,使用稳定性考察,粒径变化,乳析指数等物理指标评价了各组乳剂的稳定性。接下来通过行为学方法对制备的高稳定性乳剂进行生物学功能验证和比较磷脂酰丝氨酸乳剂和磷脂酰丝氨酸粉剂在生物利用度上的差异。探讨了磷脂酰丝氨酸发挥神经保护作用的相关机制研究。本论文主要分为以下四个部分:一、磷脂酰丝氨酸乳剂的制备及其稳定性研究通过响应面的方法,筛选出最优的磷脂酰丝氨酸乳剂配方。根据最优配方制备不同浓度磷脂酰丝氨酸的乳剂并通过粒径变化,乳析指数评价各组乳剂的稳定性。在稳定性考察实验中发现PS可以提高乳剂的稳定性。接下来,我们的结果表明PS提高乳剂稳定性是与乳剂外相粘度的增加和界面张力、离心稳定常数的降低相关。二、磷脂酰丝氨酸的生物学功能验证通过水迷宫的实验,验证磷脂酰丝氨酸乳剂在提升小鼠的空间记忆能力和学习能力方面效果等同于或优于磷脂酰丝氨酸粉剂,经过PS干预后,小鼠水迷宫训练阶段的逃逸时间显著低于对照组小鼠。通过旷场实验验证了额外补充磷脂酰丝氨酸粉剂/乳剂不会对小鼠的情绪造成不好的影响,验证了磷脂酰丝氨酸的安全性。ELISA的结果表明2%PS乳剂组小鼠大脑中的PS含量（12 mg/L）显著高于2%PS粉剂（8.5 mg/L）。证明磷脂酰丝氨酸乳剂在大脑中富集的程度高于磷脂酰丝氨酸粉剂。三、磷脂酰丝氨酸乳提升小鼠空间记忆能力和学习能力的机制研究通过Western Blot检测了脑神经营养因子（BDNF）及其受体Trk B和支架蛋白PSD95的蛋白表达水平,评价PS对神经细胞的保护作用。然后通过免疫组织化学染色的方法检测了髓鞘碱性蛋白的表达情况,以评价小鼠神经髓鞘的稳定性。然后通过WB和RT-PCR的方法检测了与髓鞘相关的神经调节因子（Nrg-1）及其受体Erb B4的表达情况。结果显示,磷脂酰丝氨酸提升小鼠的空间记忆和学习能力可能与BDNF/Trk B信号通路和Nrg-1/Erb B4信号通路相关。四、磷脂酰丝氨酸通过Wnt信号通路增加成熟神经元的数量首先通过RT-PCR的方法发现磷脂酰丝氨酸能够上调神经干细胞标志物Nestin的基因表达。然后,通过免疫组织化学染色的方法验证了磷脂酰丝氨酸上调成熟神经元的标志物Neu N的蛋白表达。我们的结果证明了磷脂酰丝氨酸通过激活神经干细胞,使其分化成更多的成熟神经元。最后通过RT-PCR和WB的方法验证Wnt信号通路参与神经干细胞的激活过程。
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