稻瘟病是水稻主要病害之一,广泛分布在世界各水稻产区,也是我国水稻主产区的第一大病害。流行年份重病地区一般减产30-40%,严重制约了我国水稻生产的发展。据统计,全球每年因稻瘟病造成的水稻产量损失可以供6000万人食用。由稻瘟病导致的粮食减产已经成为了一个非常严重的经济问题。目前,生产上主要通过种植抗病品种和使用化学药剂进行防治。但稻瘟病菌遗传背景复杂,容易发生生理小种变化来适应抗病品种。化学防治虽然成本低、见效快,但长期使用不仅会污染环境,而且会加快稻瘟病菌变异产生抗药性。相比而言,生物防治是利用一种生物来防治另一种生物的新型无公害的防治手段,具有广阔的应用前景。本实验从木樨果实中分离筛选得到一株对稻瘟病菌生长有强烈抑制作用的细菌,将其命名为Bp6221。通过形态学和分子生物学方法鉴定其为短小芽孢杆菌。萃取实验表明,其活性成分为强极性类物质,易溶于甲醇和水等极性溶剂。Bp6221滤菌发酵液对水稻稻瘟病具有明显的抑制作用,其半数抑制浓度为0.0025mL/mL。温度实验表明,发酵液中的活性物质具有良好的热稳定性,在100℃下处理30min依旧可以保持抑菌活性不变。此外,在pH为1的强酸性环境中处理24h也不会改变活性成分的抑菌效果,表明发酵液中的抑菌物质具有良好的耐酸性。我们通过沉淀法、柱色谱法和高效液相色谱法对Bp6221发酵液中的活性成分进行分离和纯化。首先用丙酮沉淀除去发酵液中的蛋白质类物质,再使用柱色谱法进一步将发酵液中的活性成分与杂质分离。最后,我们将收集的具有活性的部分通过高效液相色谱法再一次分离提纯。结果表明,在14.112、14.188、19.140、19.384min的四个化合物具有抑菌活性。将它们分别收集,LC-MASS检测结果显示,其分子量依次为150.68、149.78、177.68、292.79。Bp6221作为芽孢杆菌的一种,对外界环境具有很强的适应能力,并广泛存在于土壤、水、空气以及动植物体内。其次级代谢产物具有活性高、分子量小、热稳定性强以及耐强酸等优点,推测其具有理想的生物农药的特点,具有广阔的发展前景。